Кенжебаева Сəуле Сағындыққызы биотехнологиядағЫ Қазіргі əдістер
жүктеу/скачать 5,04 Mb. Pdf көрінісі
|
Kenzhebayeva (1) (1) (1)
| 2.10-сурет. 7 х10 см жəне 16 х20 см натрий додецилсульфаті
қатынасумен полиакриламидті гелінде (ПААГ) электрофорез жəне 2Д ЭФ жүргізу үшiн жабдықтың жинағы: «Bio-Rad», (США) серiктестiктiң өндiрiстерi PROTEAN II xi 2-D Cell, Mini-PROTEAN 3Cell, Mini-PROTEAN 3 Dodeca Cell (www.bio-rad.com) циялауды екінші бағытта бастайды. ПААГ жолақтағы электрофорез натрийдодецилсульфатмен өткізіледі. Ол үшін жолақты рН градиенті гельдегі белоктар болатын ДСН ПААГ пластинасының үстiне сыйғызып салады жəне агарозойдың бекiтулерiне құяды. ДСН-мен кешенделген белоктар бiрiншi бағыттағы олардың бөлiнуiнде болған рН-мен градиентті гельді тастап кетедi жəне содан соң олар екiншi бағыттарда бөлiнеді. Гелдiң үйреншiктi жуандығын 1-1,5 мм құрайды. Гель əртүрлi өлшемдердi: 7х8 см, 9 х13 см, 20 х25 см иемдене алады. Белоктардың детекциясы. Əдiстiң көмегімен белоктардың бөлiну- лерiнен кейiн оларды гельдің пластинаға бiлдiруге керек. Белоктардың көруiне олардың бояуын техниканың қолдануымен жетедi. Бұл мақсат үшiн Кумаси көк, күмiс, (натрийдің тиосульфатомымен күмiстiң нит- раты), флуоресцентті бояулар (SYPRO қызыл, SYPRO қызғылт сары) пайдаланады. Белоктардың детекциясының маңызды мəселелері – оның сезгiштiгiнiң жоғарылауы. Бірақ Кумаси көк бояуы арқылы белоктардың шоғырлануларын анықтаудың мүмкiндiктерi шектелген. Бұл бояудың концентрациясы үлкен дəрежеде жеткiлiктi болмағанда, белоктар жақсы сіңіреді, ал осы уақытта бояудың төмен концентраци- ясы болмағанда, белоктар əлсiз боялады. 105 Күмiспен бояу – белоктардың көруiнің өте сезгiш радиоактивсiз əдiсі. Ол 1 нг-нан кем белоктардың концентрациясын анықтауға мүм- кiндiк бередi. Бірақ осы əдiс температураның өзгеруіне өте сезімтал болып табылады. Күмiспен бояу арқылы алынған нəтижелер басқа əдiстерiмен салыстырғанда аздау қолданылады. жүктеу/скачать 5,04 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|