Клинические дисциплины chapter clinical disciplines акушерство и гинекология obstetrics and gynecology
Определение АОА изучаемых экстрактов перманганато-
жүктеу/скачать 19,82 Mb. Pdf көрінісі
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Образец Антиоксидантная активность Пермангана- тометрический метод, мг/г LSD=0,56
- Показатель Дубильные вещества % в пере- счете на танин, (LSD= 0,78) Индекс
- 70 % этаноловый экстракт ЛСД
- Возраст деревьев Аскорбиновая кислота, мг/100 г (n=4, P Связанная LSD=0,68 Свободная
- Образец С, г/мл |К|, мкмоль/л∙мин Водный экстракт
- Аскорбиновая кислота
- Рутин(эталон)
- Keywords
- Н.Е. БУРДА, И.А. ЖУРАВЕЛЬ, В.С. КИСЛИЧЕНКО Национальный фармацевтический университет, кафедра химии природных соединений, Украина
- ИЗУЧЕНИЕ ЛЕТУЧЕЙ ФРАКЦИИ LENTINUS EDODES (BERK.) SINGER
- Ключевые слова
- Цель исследования
- Результаты и обсуждение
Определение АОА изучаемых экстрактов перманганато- метрическим методом. Для
количественной оценки
АОА экстрактов перманганатометрическим методом
используется показатель активности – В. Эта величина представляет собой сумму биологически активных веществ
(БАВ) восстанавливающего характера и выражается количеством миллиграммов кверцетина на 1 мл или 1 г препарата. Чем выше величина В, тем более высокой АОА обладает объект. В таблице 2 приведены сравнительные данные АОА водных и этаноловых экстрактов листьев абрикоса, полученных перманганатометрическим методом в зависимости от возрастных особенностей деревьев (таблица 2).
466
Таблица 2 - Антиоксидантная активность экстрактов из абрикосовых листьев (ЛСД и ЛМД) (n=4, P<0,05) Образец Антиоксидантная активность Пермангана- тометрический метод, мг/г LSD=0,56 Водный экстракт ЛСД 14,2Ã1,7 ЛМД 17,4Ã1,4 70 % этаноловый экстракт ЛСД 16,5Ã0,68 ЛМД 18,5Ã0,68
Как показывают результаты исследования, экстракт из ЛМД проявляет большую АОА, чем экстракт из листьев старых деревьев. Между водным и спиртовым экстрактами также обнаружена разница в АОА (LSD=0,56, n=4, P<0,05). Этот факт хорошо согласуется с данными по содержанию в изученных образцах таких биологически активных соединений, как все фенольные соединения, флавоноиды, витамин С (таблица 3, 4).
Таблица 3 - Содержание фенольных соединений в экстрактах из сухих листьев абрикоса (n=4, P < 0,05) на массу воздушно-сухого сырья Показатель Дубильные вещества % в пере- счете на танин, (LSD=0,78) Индекс Фолина- Дениса мг/100 г по катехину (LSD=48) Индекс ванилина, мг/100 г по катехину (LSD=6,2) Общие флавонолы мг/100 г по рутину (LSD=36) Водный экстракт ЛСД 14,0Ã1,22 1290Ã115 118Ã19
536Ã66 ЛМД 19,5Ã1,03 1272Ã160 133Ã14
679Ã66 70 % этаноловый экстракт ЛСД 20,0Ã1,48 1710Ã28 219Ã11
1603Ã105 ЛМД 23,6Ã2,44 1763Ã28 269Ã2,9
2052Ã55
Таблица 4 - Содержание аскорбиновой кислоты в листьях старых и молодых деревьев абрикоса (средние данные выражены в мг/100 г на сырой вес) Возраст деревьев Аскорбиновая кислота, мг/100 г (n=4, P<0,05) Связанная LSD=0,68 Свободная LSD=0,48 Сумма LSD=0,47 ЛСД 6Ã1,8
3,5Ã0,91 9,5Ã0,92 ЛМД 7Ã0,0
4,5Ã0,91 11,5Ã0,92 Определение АОА изучаемых экстрактов вольтамперо- метрическим методом. В этом методе в качестве модельной реакции используется процесс электровосстановления кислорода (ЭВ О 2 ) на ртутно- пленочном электроде, идущий по механизму, аналогичному восстановлению кислорода во многих объектах искусст- венного и природного происхождения. Предполагается, что антиоксиданты, имеющие восстановительную природу, реагируют с кислородом и его активными радикалами на поверхности индикаторного электрода. В качестве критерия АОА
исследуемых экстрактов используется кинетический критерий К, который отражает количество кислорода и активных кислородных радикалов, прореагировавших с антиоксидантом АО (или смесью АО) за минуту. В таблице 5 и на рисунках 1 и 2 представлены полученные данные по измерению антиокислительной активности экстрактов из листьев абрикоса вольтамперометрическим методом. Антиоксидантная активность экстрактов была сравнена с аналогичными показателями стандартных (этало- новых) антиоксидантов (рутина, танина, витамина С). Пример вольтамперограммы для эталоновых растворов витамина С, танина и рутина приведен на рисунке 1 (а, б, с), на котором видно уменьшение тока ЭВ О 2 и сдвиг потенциала в положительную область относительно максимума тока фонового электролита.
467 Рисунок 1 - Вольтамперограммы тока электровосстановления кислорода на ртутно-пленочном электроде в отсутствии (верхний кривой) и в присутствии стандартов витамина С (а), танина (б) и рутина (с) (нижние кривые) в зависимости от времени протекания процесса взаимодействия антиоксидантов с активными кислородными радикалами. Что касается активности водных и этаноловых экстрактов к кислороду, то в отличие от стандартов рутина, танина и витамина С, регистрируется увеличение тока ЭВ О 2 (рисунок 2 а, б). Поэтому кинетический критерий К для стандартных растворов отрицательный, в то время как для экстрактов – положительный. Поэтому в таблице 5 указан его модуль |К|.
Рисунок - 2 Вольтамперограммы тока электровосстановления кислорода на ртутно-пленочном электроде в отсутствии (нижняя кривая) и в присутствии (верхняя кривая) экстрактов абрикоса в зависимости от времени протекания процесса взаимодействия антиоксидантов с активными кислородными радикалами (а-водный экстракт, б- этаноловый экстракт)
Таблица 5 - Антиоксидантная активность экстрактов из абрикосовых листьев на фоне препаратов сравнения Образец С, г/мл |К|, мкмоль/л∙мин Водный экстракт 10 -2 2Å10
-2
0,532 0,754 Танин(эталон) 10 -5 10 -4 10 -3 10 -2 0,418
0,949 1,012
1,047 Аскорбиновая кислота 1,5∙10 -4
-4
7,5 ∙10 -3 0,707
2,166 5,08
Этаноловый экстракт 10 -2 183,0
a б с а б
468
2Å10 -4
199,8
Исходя из экспериментальных данных, приведенных в таблице 5, можно сделать вывод о том, что как водный, так и этаноловый экстракты листьев абрикоса обладают высокой АОА, сравнимой с примененными стандартами – танина, витамина С и рутина. Значение |К| составило для водных экстрактов 0,532 (эталоны: аскорбиновая кислота и танин) и 183 мкмоль/лÅмин при концентрации 10 -2 г/мл для этанолового экстракта (эталон: рутин). При повышении концентрации экстракта в 2 раза наблюдается значительное повышение АОА. Сдвиг
потенциала максимума тока восстановления кислорода в положительную область указывает на достаточно высокое содержание полифенольных соединений в листьях абрикоса. С целью обобщения полученных результатов был
осуществлен соответствующий корреляционный анализ (рисунок 3). Коэффициенты корреляции, определенные вольтамперметрическим методом, составили для дубильных вещест – 0,15, фенольных соединений (ФС) – 0,71, для флавонолов – 0,89 соответственно.
Рисунок 3 - Корреляция антиокислительной активности и содержания полифенольных соединений экстрактов
Таким образом, получены достоверные коэффициенты корреляции между АОА и содержанием ФС в экстрактах. Особое влияние на величину АОА экстрактов оказывают флавонолы.
На основании полученных результатов можно сделать следующие выводы: в различных модельных системах экстракт из листьев
абрикоса оказывает прямое антиоксидантное действие; этаноловый экстракт обладает более выраженным антиоксидантным действием по сравнению с раствором водного экстракта. Подавление свободно-радикального окисления имеет прямую
зависимость от концентрации: чем выше концентрация, тем больше АОА. Основной вклад в АОА листьев абрикоса вносят вещества полифенольной природы; при этом наибольшей активностью обладают флавонолы.
Дубильные вещества , % y = -0,0027x 4 + 0,1499x 3 - 3,1064x 2 + 28,061x - 92,36 R 2 = 0,1522 0 0,5
1 1,5
2 2,5
8 10 12 14 16 18 20 А О А , м к м о ль / л . сек
y = 1E-09x 4 - 3E-06x 3 + 0,0026x 2 - 0,8031x + 84,328 R 2
0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 200
400 600
800 1000
Полифенольные
соединения , мг /100 г А О А , м к м о л ь / л . с е к y = -30,357x 4 + 153,41x 3 - 281,81x 2 + 239,45x - 63,587 R 2
0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 0,5
1 1,5
2 2,5
флавонолы , мг / г А О А мк мо л / л . с е к
469 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1
ГФ. Государственная фармакопея ХI издание. Выпуски 1,2.–М: Медицина, 1998. – 397 с. 2
Ермаков А.И., Арасимович В.В, Ярош Н.П. Методы биохимического исследования растений // Агропромиздат. – 1987. – 430 с. 3
Зенков Н.К., Панкин В.З., Меньшикова Е.Б. Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологический аспекты. - М.: МАИК Наука Интерпериодика, 2001. – 343 с. 4
медицинская академия им. И.М. Сеченова. – М.: 2000. - №2. – С. 71-84. 5
Ненужное для неучей. "Научное наследство" Амирдовлат Амасиаци. - М.: Наука, 1990. – Т. 13. – 294 с. 6
Пат. 2238554 Российская Федерация, МКИ G01 N33/15 N27/26. Способ определения суммарной антиоксидантной активности биологически активных веществ / В.П. Пахомов [и др.] (РФ). – № 2003123072/15; заявл. 25.07. 03; опубл. 20.10.04, Бюл. № 15. – 3 с. 7
Штробля А.Л., Фира Л.С., Лихацкий П.Г., Пыда В.П., Вашкеба Э.М., Медвидь И.И. Изучение гепатозащитных свойств сухого экстракта из листьев абрикоса обыкновенного на модели поражения печени тетрахлорметаном // ВЕСТНИК РАМН. -2013. -№ 3 - C. 68-72. 8
Athar M. Oxidative stress and experimental carcinogenesis //Indian J. Exp. Biol. –2002. – Vol.40. – N.6. – P. 656-667. 9
Bandyopadhyay D., Chattopadhyay A., Ghosh G., Datta AG. Oxidative stress-induced ischemic heart disease: protection by antioxidants //Curr. Med. Chem. – 2004. – Vol.11. – N.3.–P.369-387. 10
Vol.59. – N.4. –P. 1-5. 11
Droge W., Free radicals in the physiological control of cell function// Physiological Reviews. –2002.–Vol.82.–P.47-95. 12
Halliwell B. Antioxidant defence mechanisms: from the beginning to the end (of the beginning) // Free Radic. Res. - 1999. - Vol. 31. - № 4. - P. 261-272. 13
Sciences J. Nutr. – 2004. – Vol.134. – P. 1105-1109. 14
Young I.S., Woodside J.V. Antioxidants in health and disease//J. Clin. Pathol. – 2001. - V.54. - N.3. - P. 176-186. 15
Willcox J.K, Ash S.L, Catignani G.L. Antioxidants and prevention of chronic disease //Critical Reviews in Food Science and Nutrition.– 2004.– Vol. 44.– P. 275-295.
STUDYING OF ANTIOXIDATIVE PROPERTIES OF EXTRACT FROM DRIED APRICOT LEAVES Resume: The results of the antioxadative properties of extract from dried apricot leaves are indicated in the article. It is proved that in various model systems extracts from the leaves of apricot has direct antioxidant effect; alcoholic extract has a strong antioxidant effect as compared with the solution of the aqueous extract. Suppression of free radical oxidation is directly dependent on the concentration: the higher the concentration, the greater the AOA. The main contribution to the AOA of leaves of apricot makes polyphenolics. The greatest activity has flavonols.
шиитаке. В результате проведенных исследований идентифицированы 17 компонентов. Доминирующими компонентами летучей фракции являются производные диизопропилнафталена и эфир 1,2-бензолдикарбоновой кислоты. В малых количествах присутствуют бензенацетальдегид, кадинол и 3-метил-6-(1-метилэтил) 2-циклогексен-1-он. Определено маркерное вещество – лентионин. Лентионин представляет собой серосодержащее соединение, которое проявляет антимикробную активность. Полученные результаты могут использоваться при стандартизации шиитаке. Ключевые слова: шиитаке, летучая фракция, газовая хроматография
к семейству Tricholomataceae. Данный гриб распространен в Азии, особенно в Японии и Китае [1,9]. Химический состав полисахаридов представлен, в частности таким веществом как лентинан. Лентинан является β-(1→3)-D- глюканом, который имеет разветвление в положении β - (1→6) [1,10]. Количественное содержание полисахаридов может
достигать 60¿ [9]. Кроме полисахаридов, шиитаке содержит комплексы: полисахарид-пептид или
полисахарид-протеин, протеогликаны, протеины (до 23¿), эритаденин, жирные кислоты, терпеноиды, стеролы, в частности эргостерол, витамины группы В, а именно В 1 , В
2 , В
12 , минеральные элементы (железо, марганец, калий, кальций, магний, кадмий, медь, фосфор, цинк) [1,3,6,9,10,11]. По данным ученых из Бангладеш компоненты летучей фракции представлены спиртами, кетонами, сульфидами, алканами, жирными кислотами. Основными компонентами летучей фракции являются октен-1-ол-3 и этил-н- амилкетон. Кроме того, присутствует характерное для шиитаке вещество – 1,3,3,5,6-пентатиепан [9]. Шиитаке применяется в качестве иммуномодулиирующего и противоопухолевого средства. Кроме того, он проявляет антисклеротическое, гепатопротекторное,
470 антиоксидантное, антибактериальное, противовирусное, противогрибковое действие [1,5,6,7,8,11,12]. Компоненты летучей
фракции шиитаке
изучены недостаточно. Поэтому существует необходимость детального изучения летучей фракции методом газовой хроматографии в грибе шиитаке.
фракции шиитаке методом газовой хроматографии. Материалы и методы исследования. Исследования проводили по следующей методике. Навеску материала (0,5 г) помещали в виалу на 20 мл, добавляли внутренний стандарт. В качестве внутреннего стандарта использовали тридекан (из расчета 50 мкг на навеску) с последующим расчетом получившейся концентрации внутреннего стандарта. В пробу добавляли 10 мл воды и отгоняли летучие соединения пробы с водяным паром в течение 2-х часов с использованием обратного холодильника с воздушным охлаждением. В процессе отгонки летучие вещества адсорбировались на внутренней поверхности обратного холодильника. Адсорбированные вещества после охлаждения системы смывали медленным добавлением 3 мл чистого пентана в сухую виалу на 10 мл. Смыв концентрировали продувкой (100 мл/мин) чистым азотом до остаточного объема экстракта 10 мкл,
который полностью отбирали хроматографическим шприцом. Дальнейшее концентрирование пробы проводили в самом шприце до объема 2 мкл. Эксперимент проводили с помощью хроматографа Agilent Technologies 6890 с масс-спектрометрическим детектором 5973. Хроматографическая колонка – капиллярная DB-5 внутренний диаметр 0,25 мм и длиной 30 м. Скорость газа- носителя (гелий) 1,2 мл/мин. Температура нагревателя ввода
пробы – 250º С. Температура термостата программировалась от 50 до 320º С со скоростью 4 град/мин. Для
идентификации компонентов использовалась библиотека масс-спектров NIST05 и WILEY 2007 с общим количеством спектров более 470000 в сочетании с программами для идентификации AMDIS и NIST [4]. Для количественных расчетов использовался метод внутреннего стандарта. Расчет содержания компонентов (мг/кг) проводили по формуле: С=К 1
2 ,
где К 1 =П 1 /П 2 (П
1 – площадь пика исследуемого вещества, П 2 –
площадь пика стандарта); К 2 =50/M (50 – вес внутреннего стандарта (мкг), введенного в образец, М – навеска образца (г)). Результаты и обсуждение. В результате проведенного эксперимента в летучей
фракции шиитаке
было идентифицировано 17 веществ. Газовая хроматограма летучей фракции шиитаке приведена на рисунке 1.
Рисунок 1 - Газовая хроматограма летучей фракции шиитаке Результаты эксперимента приведены в таблице 1. В таблице 1 приведены только идентифицированные вещества.
Таблица 1 - Время удерживания и компонентный состав летучей фракции шиитаке № п/п
Компонент Время удерживания, мин Содержа-ние, мг/кг 1 1-Октен-3-ол 7,3 55,0
2 Бензенацетальдегид 9,3 6,0
3 Ацетофенон 10 30,0
4 3-метил-6-(1-метилэтил) 2-циклогексен-1-он 16,4 29,0
5 2,4-бис (1,1-диметилэтил) фенол 24,5 47,0
6 1,2,4,6-Тетратиепан 24,98 50,0
471 7 Бензофенон 28 61,0
8 Лентионин 28,38 103,0
9 Кадинол
28,52 22,0
10 Диизопропилнафтален (1,5 или 1,6 или1,7 или 1,8 или 2,6 или 2,7) 29,11 158,0
11 Диизопропилнафтален (1,5 или 1,6 или1,7 или 1,8 или 2,6 или 2,7) 29,33 188,0
12 Диизопропилнафтален (1,5 или 1,6 или1,7 или 1,8 или 2,6 или 2,7) 30,42 73,0
13 Диизопропилнафтален (1,5 или 1,6 или1,7 или 1,8 или 2,6 или 2,7) 30,56 164,0
14 Диизопропилнафтален (1,5 или 1,6 или1,7 или 1,8 или 2,6 или 2,7) 30,69 115,0
15 1,2-бензолдикарбоновой кислоты бис (2-метилпропил) эфир 34,3 182,0
16 1-Гексадеканол 34,9 41,0
17 Гексадекановая кислота 37,5 67,0
Как видно из таблицы 1, в летучей фракции шиитаке преобладали по количественному содержанию производные диизопропилнафталена и эфир 1,2-бензолдикарбоновой кислоты. В минорных количествах присутствовали такие соединения как бензенацетальдегид (6,0 мг/кг), кадинол (22,0 мг/кг), 3-метил-6-(1-метилэтил) 2-циклогексен-1-он (29,0 мг/кг), ацетофенон (30,0 мг/кг), 1-гексадеканол (41,0 мг/кг), 2,4-бис (1,1-диметилэтил) фенол (47,0 мг/кг) и 1,2,4,6-тетратиепан (50,0 мг/кг). Следует обратить внимание на вещество лентионин, которое присутствует в количестве 103,0 мг/кг. Лентионин – 1,2,3,5,6-пентатиепан, структурная формула приведена на рисунке 2. жүктеу/скачать 19,82 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|