Курс лекций по микробиологии пятигорск, 2008 часть общая микробиология Лекция №1
Определение ОМЧ водопроводной воды
жүктеу/скачать 1,49 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Определение микробного числа дистиллированной воды . 300 мл
- Определение микробного числа речной воды. 100 мл
- Определение коли-титра и коли-индекса
- Второй этап (2-ой день)
- Третий этап (3-ий день)
| Определение ОМЧ водопроводной воды: а) берут не менее 500 мл воды с соблюдением асептики (обжигают краны, используют стерильную посуду); б) делают посев 10-кратных разведений воды (1:10, 1:100 и т.д.) в чашки Петри по 1 мл глубинным методом Коха на МПА (для бактерий) и на сусло-агар (для грибов); в) инкубируют при 37С, 24 час для бактерий и при 24С, 2-3 суток для грибов; г) считают число колоний (1 колония – 1 клетка); г) число колоний (1 колония=1 клетка) умножают на степень разведения и получают микробное число воды (т.к. объем посева - 1 мл, а ОМЧ воды – число микроорганизмов в 1 мл воды).
Определение микробного числа дистиллированной воды. 300 мл воды отбирают в стерильные бутылки из бюретки, которую обжигают ваткой, смоченной спиртом. Бутылки закрывают ватными пробками и бумажными колпачками. Дистиллированную воду для приготовления инъекционных растворов, отбирают в стерильные флаконы по 15-20 мл из ёмкостей, в которых проводится стерилизация. Посев и расчет производят так же, как и при исследовании водопроводной воды. Определение микробного числа речной воды. 100 мл воды берут при помощи батометра с определенной глубины. Делают посевы 1,0; 0,1 и 0,001 мл так же, как и при исследовании водопроводной воды. Определение коли-титра и коли-индекса. Разработаны стандарты определения этих показателей для водопроводной воды и воды артезианских скважин. Для воды открытых водоемов стандарты не разработаны и для ее анализа используют разные методы в зависимости от загрязнения воды. Для определения коли-титра воды чаще используют двухфазный бродильный метод. Двухфазный бродильный метод. Первый этап (1-ый день) – делают посев на среду Эйкмана (глюкозопептонная среда – ГПС) с поплавками для сбора газа и посевы ставят в термостат (инкубируют) при 43C на 24 часа. Для посева малых объёмов воды используется разведённая среда Эйкмана (1% пептон; 0,4% NaCl; 0,5% глюкоза). Для посева больших объёмов – концентрированная среда Эйкмана, содержащая 10-кратную концентрацию основных компонентов. Концентрированную среду Эйкмана используют для анализа водопроводной воды. Делают посев двух проб воды по 100 мл в колбы с 10 мл среды и десяти проб по 10 мл воды в пробирки с 1 мл среды. Таким образом, объем засеянной воды – 300 мл: 2 колбы по 100 мл и 10 пробирок по 10 мл. Второй этап (2-ой день) – делают пересевы на среду Эндо и РДА (розолово-дифференциальный агар) из тех колб и пробирок, где наблюдается рост. Признаки роста E. coli на среде Эйкмана - диффузное помутнение и образование газа. Посевы инкубируют при 37C 24 часа. Третий этап (3-ий день) – просматривают посевы на среде Эндо и РДА. Признаки роста E. coli на среде Эндо - образование гладких колоний красного цвета, с металлическим блеском. Признаки роста E. coli на РДА - пожелтение среды, вспенивание конденсационной жидкости и разрывы в РДА. Проводят микроскопическое подтверждение E. coli: из подозрительных колоний делают мазки и окрашивают по Граму; под микроскопом наблюдают грам «-» мелкие палочки. Проводят биохимическое подтверждение E. coli - оксидазный тест на цитохромоксидазу. Если есть цитохромоксидаза - бумажка синеет в течение 1 минуты. E. coli - оксидазоотрицательная. Оксидазный тест позволяет отличить E. coli от грамотрицательных, но оксидазоположительных бактерий семейства Pseudomonadaceae. Если обнаруживают в мазках грам «-» мелкие палочки, которые являются оксидазоотрицательными, результат анализа считается положительным (вывод: обнаружена кишечная палочка). По количеству положительных проб по специальным таблицам ГОСТа 18963-73 определяют коли-титр и коли-индекс. Например, E. coli обнаружена в одной колбе и в трёх пробирках. Ищем в таблице по вертикали 1 и горизонтали 3. На пересечении находим коли-титр 56 и коли-индекс 18. Если проводят определение коли-титра воды открытых водоемов, то для анализа используют разведённую среду Эйкмана, т.к. эта вода более загрязненная, поэтому ее засевают в малых объемах (1 мл воды + 10 мл среды). Для определения коли-индекса воды используют метод мембранных фильтров. жүктеу/скачать 1,49 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|