Егер реакция барысында қышқыл түзілсе, шыны электродты қолдануға болады.
Ең қарапайым әдіс – рН-тың реакция барысында өзгеруін бақылауға болады. Оның өзгеруі:
Фермент белсенділігі өзгеруі мүмкін;
Реакция жылдамдығы тек рН-тың өзгеруіне тәуелді емес, сонымен қатар, ерітіндінің буферлық сыйымдылығына да тәуелді, себебі белоктарда ол жоғары болады.
Тазаланбаған ферменттерде көп мөлшерде белсенді емес белоктар болады. Тазалау барысында олар алынады және буферлық сыйымдылығы өзгереді.
20.09.23
Тиімді әдістің бірі – үздіксіс титрлеу.
Тиімді әдістің бірі – үздіксіс титрлеу.
Бұл жағдайда жиі сілті қосып, рН денгейін тұрақты сақтауға болады. Буфердың мөлшері әдістің туралығына әсер етеді: егер, буфер аз болса - рНсоnst сақтау қиын, егер буфер көп болса – әдістің сезімталдығы азаяды. Қазір ыңғайлы автоматты құрылғылар бар (рН-статтар) – олар тұрақты рН мәнін ұстап тұрады және реактив мөлшерінің уақыт аралығында өзгеруін қисық арқылы сызып отырады.
20.09.23
Для определения ферментативной активности используют следующие методы: 1. Химический метод – количественное определение субстрата или продуктов с помощью химических реагентов (О-гликозилгидролазы – по образованию восстанавливающих сахаров). 2. Спектрофотометрический метод – измерение скорости ферментативной реакции по изменению поглощения субстрата при характеристической длине волны (лиазы – по образованию двойной связи). 3. Манометрический метод – определение количества газа, выделяющегося в процессе реакции (оксидазы – по поглощению О2, декарбоксилазы – по выделению СО2). 4. Поляриметрический метод – фиксируется изменение оптического вращения (β-фруктофуранозидаза). 5. Хроматографический – количественное определение субстрата или продуктов с помощью различных видов хроматографии: бумажной (анализ сахаров), тонкослойной (гликозидов со сложными агликонами), ВЭЖХ (аминокислотный анализ и др.).
Для определения ферментативной активности используют следующие методы: 1. Химический метод – количественное определение субстрата или продуктов с помощью химических реагентов (О-гликозилгидролазы – по образованию восстанавливающих сахаров). 2. Спектрофотометрический метод – измерение скорости ферментативной реакции по изменению поглощения субстрата при характеристической длине волны (лиазы – по образованию двойной связи). 3. Манометрический метод – определение количества газа, выделяющегося в процессе реакции (оксидазы – по поглощению О2, декарбоксилазы – по выделению СО2). 4. Поляриметрический метод – фиксируется изменение оптического вращения (β-фруктофуранозидаза). 5. Хроматографический – количественное определение субстрата или продуктов с помощью различных видов хроматографии: бумажной (анализ сахаров), тонкослойной (гликозидов со сложными агликонами), ВЭЖХ (аминокислотный анализ и др.).
