Лекция Хроматография грек тілінен аударғанда түс, бояу дегенді білдіреді
Бумажная хроматография (хроматография на бумаге)
жүктеу/скачать 103,12 Kb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Стационарый фазой
- Тонкослойная хроматография
| ^ Бумажная хроматография (хроматография на бумаге) относится к распределительной хроматографии. Инертным носителем служит специальная хроматографическая бумага: однородная в направлении волокон и равномерная по толщине.
Различают несколько сортов хроматографической бумаги в зависимости от ее плотности. Если бумага обеспечивает быстрое прохождение растворителя, то сокращается продолжительность анализа, но при этом может происходить не вполне четкое распределение компонентов по зонам. Поэтому выбор бумаги зависит от конкретных задач разделения. Стационарый фазой в бумажной хромотографии является вода. Это обусловлено тем, что волокна бумаги из-за гигроскопичности покрыты тонким слоем влаги, поглощенной из воздуха. Подвижная фаза должна быть несмешивающейся с водой или смешивающейся в ограниченной степени. Применяемые для этой цели органические растворители (ацетон, н-бутанол и др.) предварительно насыщают водой. Разделение компонентов происходит следующим образом. Нанесенные на бумагу разделяемые компоненты переходят в подвижную фазу и вследствие капиллярности бумаги перемещаются с различными скоростями в соответствии с их коэффициентами распределения. В результате происходит концентрирование каждого компонента в определенном участке бумажного листа – образование соответствующей зоны отдельного компонента на хроматограмме. Перемещение зоны на бумаге можно представить себе как поочередное перераспределение хроматографируемого компонента между неподвижной водной фазой органического растворителя. Для количественной оценки способности компонентов к разделению введен коэффициент , равный отношению смещения зоны растворенного вещества к смещению фронта растворителя. Следовательно, величина характеризует относительную скрость перемещения растворенного вещества, находящегося в равновесии с подвижной фазой в данный момент времени и в любом поперечном сечении бумаги. Коэффициент зависит от многих факторов: от природы носителя, хроматографируемого вещества и растворителей, от условий эксперемента и т. д. При постоянстве всех параметров хроматографирования является показателем, характерным для данного хроматографируемого компонента. Чем больше различие в величинах , тем эффективнее метод разделения веществ. По технике выполнения различают следующие бумажные хроматограммы: одномерные (восходящие и нисходящие), двухмерные, круговые. Одномерные хроматограммы получают при использовании качестве подвижной фазы одного растворителя. Для разделения сложных смесей прибегают к двухмерным хроматограммам, получаемым при помощи двух подвижных растворителей, последовательно проходящих через бумагу в двух взаимно перпендикулярных направлениях. Для получения круговой хромотограммы применяют бумагу в форме круга. Подвижная фаза перемещается от центра круга к периферии. Зоны имеют имеют форму эллипсов, так как скорость движения фазы зависит от расположения волокон бумаги. Метод бумажной хромотографии широко используется в органических и биохимических исследованиях. Он позволяет проводить разделения таких соединений, как амины, алкалоиды, сахара, углеводы, глиериды, аминокислоты, протеины, витамины, гормоны, антибиотики и др. Следует отметить, что при хроматографировании вещества не изменяются химически, что чрезвычайно важно в биологических исследованиях.
На пластину длиной 15 – 20см, шириной 4 – 20см наносят тонкий слой сорбента. На стартовую линию этого слоя помещают пробы индивидуальных веществ или их смесей. Край пластинки ниже стартовой линии погружают в растворитель, который, перемещаясь, разделяет смесь веществ. Отмечают границу подъема растворителя (линию фронта), хроматографируют пластинку в перпендикулярном направлении, сушат и после опрыскивания соответствующим проявителем компоненты смеси проявляются в виде окрашенных пятен. А – линия старта В – центр пятна С – линия фронта 1,2 – индивидуальные вещества 3 – смесь компонентов. Затем измеряют расстояние от центра пятна до стартовой линии (АВ) и от линии фронта растворителя до стартовой точки (АС). Отношение этих отрезков есть величина постоянная, характеризующая положение данного вещества на хроматограмме, его принято обозначать Rf. Четкость разделения зависит от правильного выбора сорбента и его активности. В качестве сорбентов используют оксид алюминия, силикагель, гидроксид и сульфат кальция, силикат магния, целлюлозу и иониты.
Хроматографируемые вещества обнаруживают с помощью люминесценции, обработки парами йода или опрыскивания раствором реактивов. Тонкослойную хроматографию рекомендуют для обнаружения и определения следов синтетических пестицидов. Применяя ее, можно обнаружить 30мкг гексахлорана в 1л виноградного сока. жүктеу/скачать 103,12 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|