Литература для студентов Учебная литература для студентов медицинских вузов и медицинских
Фракционирование клеточного содержимого
жүктеу/скачать 31,79 Mb. Pdf көрінісі
|
Гистология Афанасьев 2004
| Фракционирование клеточного содержимого
Фракционировать (т. е. разделять и выделять) структуры и макромолеку лы клеток можно различными методами — ультрацентрифугированием, хроматографией, электрофорезом. Подробнее эти методы описаны в учеб никах биохимии. Улътрацентрифугирование. С помощью этого метода клетки можно разде лить на органеллы и макромолекулы. Вначале разрушают клетки осмотиче ским шоком, ультразвуком или механическим воздействием. При этом мем браны (плазмолемма, эндоплазматический ретикулум) распадаются на фраг менты, из которых формируются мельчайшие пузырьки, а ядра и органеллы (митохондрии, аппарат Гольджи, лизосомы и пероксисомы) сохраняются интактными и находятся в образующей суспензии. Для разделения вышеуказанных компонентов клетки применяют высоко скоростную центрифугу (80 000—150 000 оборотов/мин). Вначале оседают (седиментируют) на дне пробирки более крупные части (ядра, цитоскелет). При дальнейшем увеличении скоростей центрифугирования надосадочных фракций последовательно оседают более мелкие частицы — сначала мито хондрии, лизосомы и пероксисомы, затем микросомы и мельчайшие пу зырьки и, наконец, рибосомы и крупные макромолекулы. При центрифуги ровании различные фракции оседают с различной скоростью, образуя в пробирке отдельные полосы, которые можно выделить и исследовать. Фракционированные клеточные экстракты (бесклеточные системы) широко используют для изучения внутриклеточных процессов, например для изуче ния биосинтеза белка, расшифровки генетического кода и др. Хроматография широко используется для фракционирования белков. Электрофорез позволяет разделить белковые молекулы с различным заря дом при помещении их водных растворов (или в твердом пористом матрик се) в электрическом поле. Методы хроматографии и электрофореза применяют для анализа пепти дов, получаемых при расщеплении белковой молекулы, и получения так на зываемых пептидных карт белков. Подробно эти методы описаны в учебни ках биохимии. жүктеу/скачать 31,79 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|