О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология


Культуры микроорганизмов (известные или изучаемые)



Pdf көрінісі
бет64/305
Дата20.12.2022
өлшемі14,39 Mb.
#58441
түріУчебник
1   ...   60   61   62   63   64   65   66   67   ...   305
Байланысты:
8dccb36

Культуры микроорганизмов (известные или изучаемые). В работе с 
фагом применяют 20-24-часовые культуры, выращенные на агаре, или 2-6-
часовые культуры в жидких средах. Чистоту культуры устанавливают в 
мазках, окрашенных фуксином Пфейффера или по Граму. Из культур, 
выращенных на скошенном агаре, готовят взвесь. В пробирку с культурой 
наливают 3-5 мл изотонического раствора натрия хлорида. Вращая пробирку 
между ладонями, осторожно смывают культуру с поверхности среды так, 
чтобы не намочить пробку. Взвесь переносят в стерильную пробирку и 
разводят изотоническим раствором натрия хлорида 1:10 (0,5 мл взвеси в 4,5 мл 
раствора). 
При работе с фагом необходима стерильная посуда (градуированные и 
пастеровские пипетки, чашки Петри, пробирки, колбы, ступки), термостат, 
фильтровальное устройство, центрифуга, штативы, прибор для счета колоний. 
Внимание! Вся работа с фагом требует соблюдения асептики. 


Качественные методы 
О наличии фага в том или ином субстрате узнают по лизису чувствительной 
к нему микробной культуры (тест-культура). 
Обнаружение фага на плотных средах. Тест-культуру засевают "газоном" 
(см. главу 7) на поверхность агара в чашке Петри. Посев подсушивают в 
термостате 30-40 мин при открытой крышке, после чего на него наносят каплю 
изучаемого материала. Через несколько минут, когда жидкость впитается, 
чашки помещают в термостат на 18-20 ч. Если в изучаемом материале есть фаг, 
произойдет лизис культуры и на месте, куда была нанесена капля, культура 
или совсем не вырастет (сплошной лизис) или образуются отдельные колонии 
фага. 
Обнаружение фага в жидких средах. В две пробирки с одинаковым 
количеством бульона вносят по одной капле культуры, микроба, в отношении 
которого изучают фаг. В одну из них добавляют исследуемый фаг или 
фильтрат материала, в котором его определяют. Вторая пробирка служит 
контролем роста культуры. Пробирки помещают в термостат на 12-20 ч. Учет 
результатов производят только при наличии роста культуры в контроле 
(помутнение среды). Отсутствие видимого роста или последующее 
просветление среды в пробирке с исследуемым материалом свидетельствует о 
присутствии фага. Если содержимое этой пробирки мутное, исследование 
необходимо дополнить посевом на плотную среду: помутнение могло 
произойти от роста устойчивой к фагу культуры. Только в том случае, если в 
посеве на агар фаг не будет обнаружен, можно сделать вывод, что его нет в 
изучаемом материале. 
Количественные методы 
Количественные методы имеют большое значение при проведении многих 
исследований, в том числе и фага. Врачу нужно знать активность фага, чтобы 
правильно установить его дозу при лечебно-профилактическом применении, 
исследователю - чтобы выяснить, как изменяется активность фага в 
эксперименте. 
Активность фага выражают понятием титр, различая титр фага в жидкой и 
на плотной среде. 
При исследовании в жидкой среде (по Аппельману) титр фага - это 
наибольшее его разведение (или наименьшее количество), которое подавляет 
рост тест-культуры в условиях данного опыта. 
На плотной среде (титрование по Грациа) титр фага - количество частиц 
(корпускул) фага в 1 мл исходного материала. 




Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   60   61   62   63   64   65   66   67   ...   305




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет