О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология


Титрование фага по Аппельману (в жидкой среде)



Pdf көрінісі
бет65/305
Дата20.12.2022
өлшемі14,39 Mb.
#58441
түріУчебник
1   ...   61   62   63   64   65   66   67   68   ...   305
Байланысты:
8dccb36

Титрование фага по Аппельману (в жидкой среде). При титровании фага 
объем и состав среды, температура, аэрация, количество микробов, пробирки, 
в которых проводят титрование (диаметр, конфигурация дна, толщина стекла), 
должны быть одинаковыми. Изменяется только количество фага. 
Все компоненты, участвующие в биологических опытах, подлежат 
обязательному контролю на правильность их работы. 
При титровании фага ставят контроль фага и бульона на стерильность, 
контроль культуры - на ее жизнеспособность. 
Постановка опыта. 1. В 12 стерильных пробирок наливают по 4,5 мл 
стерильного бульона. Уровень жидкости во всех пробирках должен быть 
одинаковым. Если это не так, значит допущена ошибка. В этом случае 
нестандартную пробирку заменяют новой и заново наполняют бульоном. При 
разливе бульона пользуются пипетками вместимостью 5-10 мл. 
2. Пробирки ставят в штатив и нумеруют от 1 до 10, на одной из оставшихся 
пробирок пишут "КК" (контроль культуры), на другой - "КФ" (контроль фага). 
Все пробирки, в которых проводят опыт, должны быть надписаны. 
3. В десяти пробирках готовят последовательные десятикратные разведения 
фага от 10
-1
до 10
-10
(табл. 9). В 1-ю пробирку вносят 0,5 мл фага. Такое же 
количество вносят в пробирку контроля фага. Сменив пипетку, новой 
пипеткой тщательно перемешивают содержимое 1-й пробирки и переносят 0,5 
мл его во 2-ю пробирку; 0,5 мл содержимого 2-й пробирки переносят в 3-ю и 
так далее до 10-й пробирки, меняя каждый раз пипетки. Перемешав 
содержимое 10-й пробирки, 0,5 мл жидкости из нее выливают в 
дезинфицирующий раствор. Также поступают с содержимым пробирки 
контроля фага. Для разведения фага пользуются пипетками вместимостью 1-2 
мл. Проверяют уровень жидкости в пробирках. Он должен быть одинаковым. 


 
Таблица 9. Схема титрования фага по Аппельману 
Условные обозначения: + рост культуры, - отсутствие роста культуры. 
Примечание. Стрелки указывают перенос фага из пробирки в пробирку. Из 
пробирки 10 и из пробирки контроля фага 0,5 мл выливают в 
дезинфецирующий раствор. 
4. Во все пробирки, кроме пробирки контроля фага, вносят по 1 капле (0,05 
мл) взвеси тест-культуры. Пробирки встряхивают. Во всех пробирках, кроме 
пробирки контроля фага, должна появиться слегка заметная муть. Если этого 
не происходит, все операции с нестандартной пробиркой повторяют вновь. 
5. Пробирки помещают в термостат на 18-20 ч, после чего учитывают 
результат титрования. Учет результатов обязательно начинают с контролей. 
При правильной постановке опыта в контроле культуры должно быть 
размножение бактерий - содержимое пробирки становится мутным. Этот 
контроль позволяет сделать вывод, что взятая в опыт культура жизнеспособна 
и что питательная среда обеспечивает ее развитие в данных условиях опыта. 
Значит, если в пробирках с фагом культура не выросла, на нее подействовал 
фаг. 
Жидкость в пробирке с контролем фага должна остаться прозрачной. Этот 
контроль позволяет сделать вывод, что посуда, бульон и фаг стерильны. 
При правильных результатах в контролях регистрируют характер 
изменений в первых десяти пробирках. Рост культуры в пробирках "опытного" 
ряда говорит об отсутствии или недостаточном количестве в них фага. 
Устанавливают титр фага, т. е. его наибольшее разведение, в котором 


произошел лизис культуры (содержимое пробирки прозрачно). Обозначают 
титр степенью разведения фага с обратным знаком, что соответствует 
порядковому номеру пробирки. Например, если культура не растет в первых 
семи пробирках, титр фага равен 10
-7
(см. табл. 9). 


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   61   62   63   64   65   66   67   68   ...   305




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет