Оригинальные исследования Лазерная медицина. 2019. Т. 23, вып
Key words: platelets, platelet granules, low-dose irradiation, activation of platelets, degranulation of platelets. For citations
жүктеу/скачать 146,28 Kb. Pdf көрінісі
|
464-501-1-SM
- Бұл бет үшін навигация:
- Contacts: Makarov M.S., e-mail: mcsimmc@yandex.ru Введение
- Материал и методы
| Key words:
platelets, platelet granules, low-dose irradiation, activation of platelets, degranulation of platelets. For citations: Makarov M.S., Khvatov V.B. Morphofunctional properties of human platelets exposed to in situ low-intensity laser irradiation. Lasernaya Medicina. 23 (2): 26–31. [In Russ.]. Contacts: Makarov M.S., e-mail: mcsimmc@yandex.ru Введение Низкоинтенсивное лазерное излучение (НИЛИ) в видимой части спектра способно стимулировать мно- гие процессы в клетках человека [2, 8, 18]. Показано, что облучение диплоидных клеток монохроматичным красным светом (630–638 нм) повышает их пролифера- тивную и миграционную активность [8, 15], запускает работу систем внутриклеточного сигналинга [2, 16], в условиях in vivo стимулирует процессы ангиогене- за, способствует улучшению состояния пациентов при острых отравлениях, панкреатите, холецистите и дру- гих патологиях [3, 7, 8, 11]. Клинический эффект фото- модификации крови в значительной степени основан на увеличении активности клеточных компонентов крови, в частности тромбоцитов [11, 18]. Считается, что видимый свет в фиолетово-сине-зеленой области модулирует агрегационную активность тромбоцитов, а красный цвет – подавляет [7, 10, 12]. Однако эти ис- следования проводились без подробного морфофунк- ционального анализа клеток. Адекватно оценить мор- фофункциональный статус тромбоцитов, облученных НИЛИ, можно с помощью микроскопических методов исследования, включающих витальное (прижизненное) окрашивание клеток [5, 13]. Цель работы – изучить морфофункциональные свойства тромбоцитов человека, облученных in situ мо- нохроматическим светом разной длины волны. Материал и методы Исследовали тромбоциты доноров крови, получен- ные путем автоматического афереза на сепараторе крови Trima Accel (Терумо БСТ, США). Для морфофункцио- нального анализа тромбоцитов использовали оригиналь- ный метод, основанный на витальном окрашивании кле- ток трипафлавином и акридиновым оранжевым с после- дующим их анализом во флуоресцентном микроскопе [5]. Витальное окрашивание позволяет оценить структурную целостность и функциональную активность тромбоцитов без нарушения их жизнеспособности. Суспензию с ви- тально окрашенными тромбоцитами в объеме 10–20 мкл наносили на предметное стекло, накрывали покровным стеклом (толщина 0,2 мм), после чего in situ проводили низкоимпульсное облучение с помощью лазерной ус- тановки в составе конфокального микроскопа «Nikon D-Eclipse C1» (Nikon, Япония) под объективом ×4. Для облучения использовали модулированный ультрафиоле- товый свет (λ = 408 нм, плотность мощности 40 мВт/см 2 , частота 150 Гц), голубой свет (λ = 488 нм, плотность мощности 20 мВт/см 2 ), зеленый свет (λ = 543 нм, плот- ность мощности 20 мВт/см 2 , частота 80 Гц) и красный свет (λ = 637 нм, плотность мощности 5, 10 и 20 мВт/см 2 , частота 80 Гц). Продолжительность облучения состав- ляла 0,5–60 мин. В процессе морфофункционального исследования тромбоцитов до и после облучения опреде- ляли содержание адгезивно активных клеток с гранулами (биологически полноценные тромбоциты), оценивали общую морфологию тромбоцитов и рисунок распреде- ления в них гранул, наличие и размер тромбоцитарных агрегатов. Полученные данные обрабатывали с помощью методов вариационной статистики с использованием па- кета программ «Microsoft Excel 2000». Вычисляли сред- ние арифметические значения (M) и среднеквадратич- ные отклонения (σ). Для оценки различий использовали t-критерий Стьюдента и критерий хи-квадрат для малых выборок. Различия значений считали достоверными при уровне значимости более 95% (р < 0,05). жүктеу/скачать 146,28 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|