ОңТҮстік қазақстан медицина академиясы, хабаршы №4 942, 2021 жыл, том 2

жүктеу/скачать 3,39 Mb.

Pdf көрінісі

бет	114/212
Дата	14.10.2023
өлшемі	3,39 Mb.
	#114552

1 ... 110 111 112 113 114 115 116 117 ... 212

Байланысты:
№4942021том2

Материалдар мен әдістер
Ақуыз препараттарын алу.
Рековериндердің миристоилденген рекомбинантты формаларының
препараттары бұрын біз жасаған процедураны қолдана отырып алынды және шығарылды [3]. Кавеолин-1
(Cavy) жабайы түрінің N-шеткі фрагментінің рекомбинантты формалары және кавеолин-1 (CavE)
фосфорланған формасына сәйкес келетін оның миметикасы біздің әдістемелерімізге сәйкес алынды және
бөлінді [4].
Афинитті сорбенттегі ақуыздың тұнбасы.
Рековериннің кавеолин-1-мен байланысуы сәйкесінше
«pull-down assay» талдауымен анықталды.

Адам мен ірі қара мал рековерин мономері мен димері (mRc
және dRc) өндірушінің нұсқауларына сәйкес CavY кавеолин фрагменті және оның CavE миметикасымен
тұндырылды, өндірушінің нұсқауларына сәйкес Sepharose CL-4B сорбентімен байланыстырылды [5].
Рековериннің әр формасынан (50 мкг) 30 мкл 75% инкубацияланды (об./ об.) бөлме температурасында 30
мин бойы cav1-101-сефароз суспензиясы (Eppendorf термомиксері, 1200 айн / мин) 20 мМ трис-HCl
буферінде (pH 7.5), 100 мМ NaCl, 2 мм MgCl2, құрамында 1 мМ CaCl2 немесе 2 мМ EGTA бар.
Инкубациядан кейін сорбентті 0.1% Tween-20 қосып, сол буферлермен үш рет шаяды. Байланысқан

ОҢТҮСТІК ҚАЗАҚСТАН МЕДИЦИНА АКАДЕМИЯСЫ, ХАБАРШЫ №4(942, 2021 жыл, ТОМ 2

74
ақуыздар белоктардың электрофорезіне сынамалар дайындау үшін бір реттік буфермен 20 мкл элюирленді
және денатурациялық жағдайларда полиакриламидті гельде (ПААГ) электрофоретикалық талдау жүргізілді.
Байланысқан ақуыз мөлшері GEL Analyzer 2010а бағдарламасының көмегімен денситометриялық түрде
анықталды.
Аналитикалық процедуралар.
Ақуыз препараттарының электрофорезі Лэмли әдісі бойынша [6]
12% немесе 15% ПААГ - да 10% Na-ДДС қатысуымен жүргізілді. Ерітінділердегі ақуыздардың
концентрациясы Брэдфорд әдісімен анықталды [7].

жүктеу/скачать 3,39 Mb.

Достарыңызбен бөлісу:

1 ... 110 111 112 113 114 115 116 117 ... 212