Хламидии : иллюстрированное учебное пособие
жүктеу/скачать 1,37 Mb. Pdf көрінісі
|
UMK 2017 022
- Бұл бет үшін навигация:
- Цитоскопические методы
- Иммуноморфологические методы
- Метод прямой иммунофлюоресценции
|
Диагностика хламидиозов При диагностике хламидиозов чаще всего используют цитоскопические методы, иммуноморфологические методы, методы иммуноферментного анализа и метод полимеразной цепной реакции. Материалом для исследования служат выделения и соскобы из уретры у мужчин, из уретры и цервикального канала у женщин при урогенитальном хламидиозе, соскобы с конъюнктивы у больных трахомой, мокрота при хламидийной пневмонии и другие выделения. Цитоскопические методы направлены на обнаружение цитоплазматических включений. Исследуемый материал наносят на предметное стекло, высушивают, фиксируют и окрашивают. Наиболее распространенный метод окраски – по Романовскому-Гимзе. При этом цитоплазма клеток окрашивается в голубой цвет, ядра клеток – в фиолетово-синий цвет, а цитоплазматические включения хламидий определяются в виде темно-синих (на стадии элементарных телец) или розовых (на стадии ретикулярных телец) микроколоний. Иммуноморфологические методы направлены на обнаружение антигенных субстанций хламидий в исследуемом материале. При этом антитела диагностической антихламидийной сыворотки соединены с какой-либо меткой – люминесцирующей (ФИТЦ-антитела) или ферментной (энзим-меченые антитела). К иммуноморфологическим методам в первую очередь относятся метод прямой иммунофлюоресценции и метод непрямой иммунофлюоресценции. Метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ-метод) предусматривает прямое выявление антигенов хламидий. Исследуемый материал обрабатывают люминесцирующей сывороткой, содержащей ФИТЦ-меченые моноклональные антитела. При люминесцентной микроскопии включения хламидий определяются в виде зеленой или желто-зеленой флюоресценции на коричнево-оранжевом фоне цитоплазмы клеток. Включения могут иметь зернистую или гомогенную структуру. Для проведения этого метода различные фирмы выпускают диагностические наборы (рисунок 14). 14 Рисунок 14 – Диагностический набор для выявления хламидийных антигенов методом прямой иммунофлюоресценции. В частности, при использовании ХламиСлайда готовят мазок-отпечаток, высушивают и фиксируют его. На приготовленный мазок наносят препарат “ХламиСлайд” с ФИТЦ-мечеными хламидийными антителами и после экспозиции микроскопируют в люминесцентном микроскопе. Результат считается положительным, если в мазке регистрируется ярко-зеленое свечение телец хламидий, расположенных внеклеточно или внутриклеточно. Эпителиальные клетки окрашиваются в оранжево-красный цвет. При отрицательном результате специфическое свечение отсутствует (рисунок 15). Рисунок 15 – C. trachomatis в пораженных клетках. ПИФ-метод. Реагенты одних фирм представляют собой ФИТЦ-меченые моноклональные антитела к основному белку наружной мембраны хламидий (МОМР), а реагенты других фирм - моноклональные антитела к ЛПС хламидий. В России также выпускаются диагностические наборы, содержащие моноклональные антитела к ЛПС хламидий и моноклональные антитела к белковым антигенам хламидий. жүктеу/скачать 1,37 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|