Решением Учебно-методического совета фгбоу дпо рманпо минздрава России «28» ноября 2016г
жүктеу/скачать 4,09 Mb. Pdf көрінісі
|
| Электрофорез. Электрофорез – движение заряженных частиц в
растворе под действием электрического поля. Электрофоретический метод в клинической лабораторной диагностике – это способ пространственного разделения молекул, имеющих разный заряд и размеры, путем помещения их в электрическое поле. Электрофореграмма белков биологических жидкостей человека (сыворотка крови, моча, спинномозговая жидкость) позволяет получить значительную диагностическую информацию. У здорового человека относительное содержание белковых фракций при определении их в сыворотке крови методом электрофореза на бумаге, следующее: альбумины – 55-65%, α1-глобулины 3-6%, α2-глобулины 7-10%, β-глобулины – 7-12%, γ- глобулины – 13-19%. При многих заболеваниях наблюдается изменение соотношения фракций, тогда как общее количество белка обычно мало изменяется. Выявление этих изменений с помощью метода электрофореза широко используется в диагностических целях. Основными типами электрофореза являются: зональный электрофорез, изотахофорез, изоэлектрическое фокусирование, иммуноэлектрофорез. Зональный электрофорез ведется при постоянном (не изменяющемся) значении рН буферного раствора, заполняющего данный носитель (бумагу, гель, др.). Исследуемый образец наносится пятном или тонким слоем на 155 носитель, по которому и перемещается в электрическом поле. Усложненным вариантом зонального электрофореза является диск-электрофорез (многофазный зональный электрофорез), при котором рН и другие характеристики, постоянные внутри одной «фазы», при переходе к другой “фазе” скачкообразно изменяются. При изоэлектрическом фокусировании в среде для электрофореза создается плавный градиент рН. Белок останавливается в зоне, где значение рН равно его изоэлектрической точке (pI). Для создания градиента рН обычно используют раствор полиамино-поликарбоновых кислот, которым насыщают носитель. В отсутствии электрического поля эта смесь обычно имеет рН=6,5. При наложении электрического поля указанные кислоты обеспечивают линейный градиент рН от 3 до 10. При изотахофорезе заряженные ионы сначала разделяются в соответствии с величинами их заряда и подвижности, а затем перемещаются в электрическом поле с одинаковыми и постоянными скоростями. Иммуноэлектрофорез сочетает в себе электрофоретическое разделение белков с иммунопреципитацией, основанной на реакции «антиген – антитело». Этот тип электрофореза превосходит остальные по чувствительности и разрешающей способности. В электрофорезе важен тип носителя жидкой фазы. Преимущества и ограничения нескольких носителей, используемых в клинической биохимии представлены в табл. 2.3. С помощью электрофореза возможно разделение не только белковых фракций, но также липопротеидов, изоферментов лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы, выделений фракции гликированного гемоглобина. Это достигается в новых разработках, в частности при использовании капиллярного электрофореза. Капиллярный электрофорез основан на разделении компонентов сложной смеси в кварцевом капилляре под действием приложенного электрического поля. Микрообъем анализируемого раствора (около 2 нл) 156 вводят в капилляр, предварительно заполненный подходящим буфером – электролитом. После подачи к концам капилляра высокого напряжения (до 30 кВ), компоненты смеси начинают двигаться по капилляру с разной скоростью, зависящей от заряда и массы и в разное время достигают зоны детектирования. Таблица 2.3 жүктеу/скачать 4,09 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|