Решением Учебно-методического совета фгбоу дпо рманпо минздрава России «28» ноября 2016г

152 
световая волна как бы огибает частицу, взаимодействует с ней и отклоняется 
от прямолинейного распространения на небольшой угол – малоугловое 
светорассеяние. Такой тип рассеивания возникает при взаимодействии света 
с поверхностью клеток разного размера. При одновременной регистрации 
бокового и прямого светорассеяния возможно выделить все клеточные 
популяции лейкоцитов. Флюоресцентный канал применяется для изучения 
клеточных маркеров, при этом используются моноклональные антитела 
(МАТ) к мембранным и внутриклеточным компонентам, меченные 
различными флюорохромными красителями. При облучении клеток длиной 
волны, возбуждающей флюорохром, происходит поглощение света. Затем 
флюорохром испускает свет, но уже меньшей интенсивности (большей 
длины волны), чем поглощенный. Кроме того, флюорохром испускает свет 
во все стороны, поэтому флюоресценцию можно регистрировать под любым 
углом по отношению к облучаемому свету.  
Проточные цитофлюориметры могут быть оборудованы одним, двумя 
или более лазерами. В случае использования двух или более лазеров в 
исследования могут быть включены флюорохромы, возбуждаемые на разных 
длинах волн. Использование нескольких флюоресцентных меток позволяет 
проводить одновременный двух-, трехцветный и более анализ, так как 
каждый флюорохром при прохождении через луч лазера испускает свет 
различной длины волны. Наиболее часто в качестве красящей метки 
применяется флюоресцеинизотиоционат (FITC), который спускает свет, 
улавливаемый в зеленой области спектра, фикоэритрин (РЕ) – красное 
свечение. При выборе сочетаний флюорохромов для одновременного 
определения нескольких клеточных маркеров следует учитывать способность 
оптической системы прибора разделять и одновременно регистрировать 
сигналы от используемых флюорохромов. Использование многоцветного 
проточноцитометрического исследования позволяет одновременно получить 
информацию о нескольких антигенах на поверхности клеток. 

153 
Проточная цитофлюориметрия – быстро развивающаяся технология в 
клинической лабораторной диагностике. Основными направлениями 
проточной цитометрии считаются количественная и функциональная 
характеристика клеток: 

поверхностные антигены; 

внутриклеточные цитоплазматические молекулы – цитокины, 
бактерицидные белки, сигнальные молекулы, белки цитоскелета; 

внутриклеточные ядерные молекулы (транскрипционные факторы, 
ядерные белки, ДНК и ее фрагменты, РНК, хромосомы, мембранный 
потенциал митохондрий, концентрация ионов Са
2+
, активность ферментов; 

оценка абсолютного числа CD4
+
Т-лимфоцитов для оценки 
активности ВИЧ. 
Проточная 
цитофлюориметрия 
играет 
ключевую 
роль 
в 
онкогематологии. Она используется с целью диагностики и мониторирования 
опухолевой популяции при острых лейкозах и лимфопролиферативных 
заболеваниях (ЛПЗ), прогноза, подсчета абсолютного количества стволовых 
гемопоэтических 
клеток, 
диагностики 
пароксизмальной 
ночной 
гемоглобинурии.
Разработка гибридомной технологии получения моноклональных 
антител (МАТ) предоставила возможность изучить линейно-специфические, 
дифференцировочные, активационные антигены клеток. МАТ со сходной 
специфичностью были объединены в группы (кластеры). Первоначальное 
значение понятия «кластер дифференцировки» (CD – сluster of differentiation) 
подразумевал набор МАТ, распознающих одну и ту же антигенную 
структуру на поверхности клеток. Со временем термин «кластер 
дифференцировки» стал означать саму структуру на клеточной мембране, 
отражающей фенотип клетки. Известно более 300 кластеров дифференцировки 
клеток человека и их число постоянно пополняется. 
Проточная цитофлюориметрия позволяет исследовать антигены, 
имеющие прогностическое значение. Широкое использование в клинической 

154 
практике моноклональных антител значительно улучшило результаты 
лечения больных лимфомами. Для успешного их применения необходимо до 
начала 
терапии 
исследовать 
степень 
экспрессии 
антигенов 
на 
соответствующих 
клетках-мишенях. 
Используя 
метод 
проточной 
цитофлюориметрии, в процессе лечения можно проводить мониторинг 
остаточной популяции опухолевых клеток. Широкое использование 
проточной цитофлюориметрии в онкогематологии привело к качественно 
новой диагностике лейкозов и лимфом, а также к разработке новых подходов 
в оценке эффективности лечения и мониторинга минимальной остаточной 
болезни, определяющей дальнейшую тактику ведения больных. 

жүктеу/скачать 4,09 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: