Решением Учебно-методического совета фгбоу дпо рманпо минздрава России «28» ноября 2016г
Аналитический этап лабораторного анализа
жүктеу/скачать 4,09 Mb. Pdf көрінісі
|
| 2.5. Аналитический этап лабораторного анализа
2.5.1. Техника основных манипуляций при выполнении лабораторного анализа Техника дозирования жидкостей. Дозирование пробы и реагентов – обязательный этап большинства аналитических процессов. Точность дозирования напрямую влияет на точность получаемого результата. Практически все дозаторы, применяемые в КДЛ, используют один из двух методов: 1. Метод прямого дозирования – сначала жидкость заполняет точно заданный объем, а затем она максимально полно извлекается из этого объема в пробирку. При пипетировании нажимают на головку плунжера большим пальцем до первой остановки. Погрузив наконечник пипетки в раствор, медленно освобождают плунжер. В наконечник набирается необходимый 97 объем жидкости. Для того чтобы слить жидкость, повторно нажимают на головку плунжера, но теперь уже до второй остановки, то есть до упора. При этом из наконечника удаляются все остатки жидкости. Затем палец подымают, плунжер возвращается в исходное положение 2. Метод обратного дозирования – жидкость заполняет больший объем, а затем из устройства извлекается строго заданное количество жидкости. При обратном способе пипетирования нажимают на головку плунжера большим пальцем до упора. Погружают наконечник пипетки в раствор и медленно освобождают плунжер. В наконечник набирается объем жидкости, но несколько больший, чем необходимо. Для дозировки заданного объема нажимают на головку плунжера только до первой остановки. Остающаяся после этого в наконечнике часть жидкости в измеряемый объем не входит. Ее необходимо удалить, что осуществляют дожатием плунжера до упора. Затем освобождают палец и плунжер возвращается в исходное положение. Обратным способом удобно пользоваться при дозировке легко пенящихся и вязких жидкостей. При использовании стеклянных пипеточных дозаторов лаборант визуально следит за заполнением жидкостью объема пипетки, стараясь, чтобы мениск точно совпал с градуировочной риской, нанесенной на пипетке. Основной недостаток этой технологии – большая зависимость точности дозирования от мастерства и внимательности лаборанта. Автоматические пипетки служат для скоростного манипулирования при отборе и дозировании жидкостей, представляют собой устройство с пневматическим механизмом, действие которого основано на вытеснении жидкости воздухом. По конструктивным особенностям автоматические пипетки можно характеризовать по следующим основным группам: механические и электронные, одноканальные и многоканальные, фиксированного и переменного объема. Механические автопипетки снабжены пружинным механизмом и дозирующим устройством – микрометрическим винтом. Приводятся в 98 действие вручную. В электронных пипетках пневматический механизм управляется микропроцессором с электропитанием от аккумуляторов. Одноканальные автопипетки нашли наибольшее применение в лабораториях. Многоканальные автопипетки по производительности значительно превышают одноканальные, но область их применения ограничена рамками узкоспециальной аппаратуры. Это определяет конфигурацию их концевой части. Чаще всего в лабораториях используются многоканальные пипетки для иммунологических исследований, которые рассчитаны на работу с плашками строго определенных параметров. Точность и воспроизводимость измерений, выполняемых автопипетками, колеблется в пределах от ±0,5% до ±3%, в зависимости от типа автопипеток. Автопипетки, как правило, не увеличивают точность дозирования, они лишь облегчают и ускоряют работу. Поэтому для точных аналитических целей предпочтительно использовать калиброванные по объему (взвешиванием на аналитических весах объема дозирования дистиллированной воды) стеклянные пипетки. Имеются ограничения на величину дозирования, особенно при ручном исполнении. При работе с биологическим материалом с разной плотностью (кровь, плазма, сыворотка крови, моча, слюнная жидкость и т.д.) рекомендуется при ручном дозировании использовать объемы не менее 3-5 мкл. Учитывая, что при проведении биохимических, иммунохимических исследований соотношение биопроба/реагент, как правило, находятся в соотношении 1:10-1:100, объем реакционной смеси (кювет) не должен быть меньше 300-500 мкл. Первоначальная калибровка дозаторов проводится на предприятии- изготовителе. Калибровка в условиях лаборатории должна осуществляться дистиллированной водой при температуре +22 градуса, и для калибровки требуются аналитические весы с точностью порядка 0,001 мг. В лабораторных анализаторах дозирование осуществляется за счет работы шаговых двигателей, использования многоканальных наконечников 99 (обеспечивают смыв реагентов с поверхностей) и сложных схем дозирования, при которых больший объем реагента смывает всю биопробу. Стандартное гарантированное дозирование в лабораторных анализаторах позволяет работать с объемами менее 1 мкл и существенно сократить количество используемых реагентов. жүктеу/скачать 4,09 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|