С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров
жүктеу/скачать 2,61 Mb. Pdf көрінісі
|
| III этап. Введение нового (рекомбинантного) гена в клетку можно
провести двумя способами: используя вектор или путем прямого введения. Вектор – молекула ДНК или РНК, способная переносить включенные в нее чужеродные гены в клетку, где эти молекулы реплицируются автономно или после интеграции с геномом (хромосомой). Не каждая молекула ДНК или РНК может быть вектором. Векторы должны обладать определенными свойствами: способность к автономной репликации в клетке реципиента; наличие области, в которую возможно встраивание необходимого фрагмента ДНК; для этого вектор должен содержать один или более сайтов рестрикции; небольшой размер, так как при длине более 15 т.п.н. значительно снижается эффективность клонирования чужеродной ДНК; наличие маркерных генов, позволяющих отличить трансформированные клетки от исходных: это могут быть селективные (придающие клеткам устойчивость к антибиотикам, гербицидам) или репортерные (клетки удобно тестировать по изменению окраски продуктов этих генов) гены; наличие соответствующего промотора, под который необходимо поместить чужеродный ген для экспрессии в клетке бактерии. Существует несколько типов векторов: бактериальные плазмиды, вирусы и т.д. Существуют гибридные векторы, содержащие ДНК фага и плазмиды. К ним относятся, например, космиды и фазмиды. Кроме того, в качестве векторов можно использовать хлоропластную и митохондриальную ДНК. Интерес представляют сегменты ДНК, которые контролируют собственную транспозицию (перемещение) из одного сайта ДНК в другой путем вырезания из исходного сайта и внедрения в новый сайт хромосомы или плазмиды – транспозоны. В качестве векторных |