III этап. Введение нового (рекомбинантного) гена в клетку можно
провести двумя способами: используя вектор или путем прямого введения.
Вектор – молекула ДНК или РНК, способная переносить
включенные в нее чужеродные гены в клетку, где эти молекулы
реплицируются автономно или после интеграции с геномом (хромосомой).
Не каждая молекула ДНК или РНК может быть вектором.
Векторы должны обладать определенными свойствами:
способность к автономной репликации в клетке реципиента;
наличие области, в которую возможно встраивание
необходимого фрагмента ДНК; для этого вектор должен содержать один
или более сайтов рестрикции;
небольшой размер, так как при длине более 15 т.п.н.
значительно снижается эффективность клонирования чужеродной ДНК;
наличие
маркерных
генов,
позволяющих
отличить
трансформированные клетки от исходных: это могут быть селективные
(придающие клеткам устойчивость к антибиотикам, гербицидам) или
репортерные (клетки удобно тестировать по изменению окраски продуктов
этих генов) гены;
наличие
соответствующего
промотора,
под
который
необходимо поместить чужеродный ген для экспрессии в клетке бактерии.
Существует несколько типов векторов: бактериальные плазмиды, вирусы и т.д. Существуют гибридные векторы, содержащие ДНК фага и
плазмиды. К ним относятся, например, космиды и фазмиды. Кроме того, в
качестве
векторов
можно
использовать
хлоропластную
и
митохондриальную ДНК. Интерес представляют сегменты ДНК, которые
контролируют собственную транспозицию (перемещение) из одного сайта
ДНК в другой путем вырезания из исходного сайта и внедрения в новый
сайт хромосомы или плазмиды – транспозоны. В качестве векторных