Получение и стандартизация сывороток

Часть 2. Частные вопросы биотехнологии. Клеточная биотехнология 
 
 
132
 
 
2. 
Проводят 
раздельную 
ПЦР-амплификацию 
(массовое 
образование  дополнительных  копий  определенных  генов)  кДНК, 
кодирующей образование L- и Н-цепей. 
3. 
Амплифицированные  кДНК  обрабатывают  эндонуклеазами 
рестрикции, разные рестрикты включают в бактериофаг лямбда. При этом 
участки,  кодирующие  образование  L-  и  Н-цепей,  встраиваются  в  разные 
векторы, и таким образом получают два разных вектора. 
4. 
Затем  кДНК  одной  L-  и  одной  Н-цепей  встраивают  в  общий 
«комбинаторный»  вектор,  при  этом  в  фаге  образуются  обе  цепи  и 
синтезируется  полноценный  Fv-фрагмент.  При  этом  проводят  скрининг 
векторов с антигенсвязывающей активностью. 
5. 
Вырезают  плазмиды,  содержащие  кДНК,  кодирующую 
образование сразу двух цепей. 
6. 
Включение кДНК в клетки бактерий E. coli. 
7. 
Выделение антигенсвязывающего Fv-фрагмента из E. coli. 
 
Получение гипериммунных специфических сывороток 
Сыворотки  гипериммунные  специфические  лошадиные  очищенные 
против  бактериальных  и  вирусных  агентов,  токсинов  микроорганизмов  и 
ядов змей получают следующим образом: 
1. 
Получение 
антигенов 
для 
иммунизации 
животных-
продуцентов (выращивание бактерий или вирусов, получение их токсинов 
или ядов змей). 
2. 
Подготовка  лошадей-продуцентов  (предварительный  карантин 
перед введением в течение 30–45 дней). Животные должны быть здоровы, 
в их крови не должны обнаруживаться антибиотики. 
3. 
Введение антигенов (иммунизация) в шею или спину лошади в 
объеме  5–25  мл  (сравнительно  небольшие  объемы)  подкожно  или 
внутримышечно. 
4. 
Взятие  крови  у  животных,  получение  иммунной  плазмы. 
Взятие  крови  проводят  венопункцией  в  стерильных  условиях.  При 
необходимости  могут  проводить  стерилизующую  фильтрацию  проб 
сыворотки или плазмы крови.  
5. 
Ферментативный  гидролиз  белков  плазмы  пепсином.  Процесс 
проводят  при  рН  3,2–3,4  и  температуре  20–24ºС  в  течение  одного  часа,  а 
затем дополнительно еще один час при рН 4,1–4,2 в реакторах. После чего 
добавляют 14,0–14,5 % раствор аммония сульфата и смесь выдерживают в 
течение одного часа при этой же температуре и затем при 58ºС в течение 

жүктеу/скачать 2,61 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: