Часть 2. Частные
вопросы биотехнологии.
Клеточная биотехнология
140
За 3–10 дней до инокуляции гибридом мышам внутрибрюшинно
вводят 0,5 мл вазелинового масла для индукции роста гибридом в
асцитной среде. 10
7
клеток гибридом ICO-90 внутрибрюшинно вводят.
Через 7–8 дней собирают асцитную жидкость. Центрифугируют ее при 4ºС
в течение 20 мин при 2500
g. В надосадочной жидкости содержатся
моноклональные антитела в наибольшей концентрации. Эту жидкость
хранят при – 50ºС.
8.
Выделение и очистка моноклональных антител
Выделяют путем аффинной хроматографии на А-сефарозе.
Асцитную или культуральную жидкость диализуют против фосфатного
буфера с рН 8,0 при 4ºС в течение 12–16 ч. Диализат наносят на колонку,
уравновешенную этим же буфером и промывают до отсутствия белка.
Моноклональные антитела, связавшиеся с сорбентом, элюируют
цитратным буфером с рН 3,0. Полученный элюат концентрируют
ультрафильтрацией.
Количественное определение моноклональных антител проводят
подходящим иммунохимическим методом. Контролируются также
остаточные и посторонние белки методом ВЭЖХ.
Достарыңызбен бөлісу: 
