Часть 3. Частные вопросы биотехнологии. Микробная биотехнология
252
20.4 Получение и стандартизация гепаринов
Получение гепарина. Легкие крупного рогатого скота измельчают,
проводят экстракцию водно-солевым раствором с pH 8,5–8,8 при 60–100
o
С
и соотношении твердой и жидкой фаз 1 к 2. Затем отделяют остатки
измельченной ткани фильтрованием и выделяют гепарин из жидкой
фракции ионообменным методом на анионите. Также могут использовать
слизистую оболочку кишечника крупного рогатого скота и свиней.
Получение низкомолекулярного гепарина. Готовят раствор гепарина в
ацетатном буфере с рН 6,0 и перемешивают с иммобилизованным
ферментом (микробная гепариназа). Суспензию перемешивают при 37°С в
течение
3
часов.
Иммобилизованное
средство
отделяют
центрифугированием, промывают раствором натрия хлорида и водой.
Промывную жидкость присоединяют к супернатанту и обессоливают на
колонке с сефадексом G-10. Сушат лиофильным способом.
Иммобилизацию ферментативного комплекса из Streptomyces kurssanovii осуществляют,
используя
реакцию
азосочетания.
К
аминоарильному производному силохрома добавляют соляную кислоту и
раствор NaNO
2
при температуре 4°С, перемешивают в течение 30 мин. Затем
промывают фосфатным буфером с рН 7,8, переносят в колбу и добавляют
культуральную жидкость Streptomyces kurssanovii. Перемешивают при 4°С
в течение 16 часов. Промывают водой, раствором натрия хлорида и снова
водой.
