С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров
жүктеу/скачать 2,61 Mb. Pdf көрінісі
|
Часть 3. Частные вопросы биотехнологии. Микробная биотехнология 252 20.4 Получение и стандартизация гепаринов Получение гепарина. Легкие крупного рогатого скота измельчают, проводят экстракцию водно-солевым раствором с pH 8,5–8,8 при 60–100 o С и соотношении твердой и жидкой фаз 1 к 2. Затем отделяют остатки измельченной ткани фильтрованием и выделяют гепарин из жидкой фракции ионообменным методом на анионите. Также могут использовать слизистую оболочку кишечника крупного рогатого скота и свиней. Получение низкомолекулярного гепарина. Готовят раствор гепарина в ацетатном буфере с рН 6,0 и перемешивают с иммобилизованным ферментом (микробная гепариназа). Суспензию перемешивают при 37°С в течение 3 часов. Иммобилизованное средство отделяют центрифугированием, промывают раствором натрия хлорида и водой. Промывную жидкость присоединяют к супернатанту и обессоливают на колонке с сефадексом G-10. Сушат лиофильным способом. Иммобилизацию ферментативного комплекса из Streptomyces kurssanovii осуществляют, используя реакцию азосочетания. К аминоарильному производному силохрома добавляют соляную кислоту и раствор NaNO 2 при температуре 4°С, перемешивают в течение 30 мин. Затем промывают фосфатным буфером с рН 7,8, переносят в колбу и добавляют культуральную жидкость Streptomyces kurssanovii. Перемешивают при 4°С в течение 16 часов. Промывают водой, раствором натрия хлорида и снова водой. жүктеу/скачать 2,61 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|