С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров
жүктеу/скачать 2,61 Mb. Pdf көрінісі
|
Farmatsevticheskaia biotekhnologiia Moiseev-DV 2020
- Бұл бет үшін навигация:
- Иммунохимические методы
Часть 2. Частные вопросы биотехнологии. Клеточная биотехнология 126 иммуноферментного анализа (тИФА, ELISA) и радиоммунологическоro анализа (РИА) с использованием моноклональных антител, специфичных к индуцирующим защитную реакцию эпитопам HBsAg, являются подходящими. Используют соответствующее число разведений испытуемой вакцины и стандартного средства. Иммунохимические методы Иммунохимические методы основаны на селективном обратимом нековалентном связывании антигенов антителами. Эти методы используются для обнаружения и количественного определения как антигенов, так и антител. Факт образования комплекса антигена с антителом и количество этого комплекса могут быть определены различными путями. Могут использоваться методы с мечеными или немечеными реагентами. В методах с использованием меченых веществ могут применяться подходящие метки, например, ферменты, флуорофоры, люминофоры и радиоизотопы. В настоящее время разработаны различные варианты твердофазного иммуноферментного анализа: 1. «Сэндвич»-метод. На твердой фазе адсорбированы антитела к исследуемому антигену. После инкубации исследуемого материала и образования комплекса «антитело – антиген» проводится удаление несвязавшихся компонентов, добавляется конъюгат, т.е. антитела к искомому антигену, меченые ферментом. По завершении инкубации, с последующим удалением непрореагировавшего коньюгата промывкой, образуется комплекс, в котором антиген как бы заключен между двумя слоями антител. Наличие меченных ферментом антител определяется при помощи соответствующего субстрата (рисунок 11.4). «Сэндвич»-метод используется для выявления HBsAg, HBeAg, антигена вируса гепатита А. В качестве ферментов-меток наиболее часто выступают пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, β-D-галактозидаза. В качестве субстрата могут быть о-фенилендиамин, тетраметилбензидин. В ИФА наибольшее распространение получил фотометрический метод регистрации активности ферментов. В качестве субстратов ферментов при этом используют такие вещества, продукты превращения которых являются окрашенными соединениями или, наоборот, окраска самих субстратов изменяется в процессе реакции. Окрашенные соединения |