С курсом факультета повышения квалификации и переподготовки кадров
жүктеу/скачать 2,61 Mb. Pdf көрінісі
|
Часть 3. Частные вопросы биотехнологии. Микробная биотехнология 282 использованием основных компонентов субстрата, максимальное потребление кислорода. В цитоплазме вначале высокое содержание РНК, ДНК не наблюдается и обнаруживается лишь через 12 ч развития. В среде происходит увеличение содержания аммонийного азота, обусловленное разложением белков соевой муки. рН вначале несколько снижается, затем повышается с 6,8 до 7,9. На этой стадии стрептомицин синтезируется в незначительном количестве. Через 28 ч масса мицелия прекращает увеличиваться, начинается вторая стадия, связанная с образованием стрептомицина. На 3 сутки рН с 7,9 уменьшается до 6,7, на 4–5 сутки – вновь возрастет до 7,7. Вторая стадия характеризуется медленным потреблением оставшихся в среде питательных веществ, замедлением роста актиномицета, снижением потребления кислорода, автолизом мицелия, максимальным образованием стрептомицина. Максимальное накопление стрептомицина наблюдается, когда автолитические процессы начинают преобладать над процессами роста. Количество аммонийного азота продолжает возрастать, что вероятно связано с разложением белков соевой муки и автолизом мицелия. Культивирование проводится при 27–29ºС и сопровождается аэрацией и перемешиванием, рН 7,5–8,0. В культуральной жидкости находятся минеральные вещества, белки, нуклеиновые кислоты, аминокислоты, полисахариды, жиры, стрептомицин и др. вещества. Основная часть стрептомицина выделяется в культуральную среду, но часть его остается в мицелии и на его поверхности. С целью извлечения стрептомицина из культуры продуцента культуральную жидкость вместе с биомассой обрабатывают минеральной кислотой. При этом весь антибиотик переходит в раствор. Мицелий отделяют фильтрованием или центрифугированием. Свободную от мицелия культуральную жидкость обрабатывают щавелевой кислотой. При этом достигается удаление белков и органических оснований, ионов металлов (кальция, магния, железа). Далее ведется выделение стрептомицина в чистом виде. Для выделения культуральной жидкости в чистом виде используются методы адсорбции на активированном угле и метод ионообменной хроматографии. Стрептомицин десорбируют с угля разбавленным спиртовым раствором соляной кислоты, после его нейтрализуют и концентрируют путем выпаривания. Полученный концентрат обрабатывается ацетоном, осаждающим солянокислый стрептомицин. Смесь фильтруется через фильтр-пресс, причем фильтрат поступает на регенерацию растворителя. К безводному спиртовому |