Учебное пособие для студентов специальности 5В060800 Экология Костанай, 2011 ббк
жүктеу/скачать 1,15 Mb.
|
abf bio biologiya uch pos sultangazina
| Техника изготовления постоянных микропрепаратов
Фиксация и хранение материала Сущность фиксации заключается в быстром умерщвлении клеток и тканей, при котором сохраняется их прижизненная структура, а все коллоиды переводятся в нерастворимое состояние и приобретают способность воспринимать красители. Фиксацию осуществляют путем погружения материала в различные ядовитые жидкости или в крепкий спирт. Материал, заготавливаемый для гистологических исследований, обычно фиксируют 96%-м раствором этилового спирта и оставляют в нем на хранение. Однако для фиксации сильно одревесневших органов растений лучше взять 80%-й его раствор и через несколько дней добавить в банки с материалом глицерин (до 1/з объема спирта). Материал для эмбриологических исследований (бутоны цветков, пыльники), а иногда и для гистологических лучше фиксировать специальными жидкостями (например, уксусным алкоголем или фиксатором Чемберлена). По истечении срока фиксации такой материал следует промыть тремя сменами 80%-го раствора этилового спирта и хранить в его растворе такой же концентрации. Если срезы готовят из живого материала, то для лучшего действия красителей их необходимо зафиксировать спиртом. Органы растений и небольшие растения, которые предполагают использовать для демонстрации, фиксируют 4%-м раствором формалина и хранят в 2%-м его растворе или в смеси 2%-го раствора формалина со спиртом любой концентрации. Окрашивание срезов Наиболее тонкие срезы переносят в чистое часовое стекло, в которое наливают при помощи пипетки небольшое количество водного раствора красителя. Через несколько минут (это зависит от концентрации красителя) краситель удаляют и срезы несколько раз промывают водой или 50%-м раствором этилового спирта до полного удаления лишней краски. Желательно контролировать это под микроскопом! Заключение срезов в глицериножелатин Окрашенные и промытые срезы переносят по одному на предметные стекла в заранее подготовленные капли расплавленного глицериножелатина. Удобно брать срезы и переносить их на миниатюрной деревянной лопаточке, которую можно легко изготовить, зачистив ножом второй конец кисточки или деревянную палочку. В процессе работы следует подогревать предметные стекла с каплями глицериножелатина под настольной электрической лампой или на чашке с горячей водой, закрытой большим стеклом. Другую каплю глицериножелатина наносят на чистое покровное стекло и аккуратно накрывают им срез. При этом под покровным стеклом не должно остаться пузырьков воздуха. Избыток глицериножелатина, выступивший из-под покровного стекла, удаляют кусочком фильтровальной бумаги. После застывания среды препарат готов. Рекомендуют подчистить края покровного стекла и окантовать лаком, олифой или нитроэмалевой краской, что удлинит срок годности препарата. Заключение срезов в канадский бальзам Перед заключением окрашенных срезов в канадский бальзам их обезвоживают спиртом и пропитывают растворителем бальзама — ксилолом. Все необходимые операции со срезами осуществляют в одном или нескольких часовых стеклах, применяя пипетки и деревянные лопаточки. В часовом стекле с окрашенными срезами сначала заменяют воду на 36%-й раствор этилового спирта. Для лучшего обезвоживания спиртовой раствор меняют два-три раза, затем заменяют его на абсолютный спирт, абсолютный спирт — на карбоксилол, а последний — на чистый ксилол. Смену ксилола проводят два-три раза. Из ксилола при помощи деревянной лопаточки один или? несколько срезов переносят на чистое предметное стекло, наносят на них каплю канадского бальзама и накрывают чистым покровным стеклом. Рекомендуют и на покровное стекло нанести небольшую каплю бальзама, что будет препятствовать появлению пузырьков воздуха под ним. Избыток канадского бальзама, который вытекает из-под покровного стекла, удаляют при помощи фильтровальной бумаги. После высыхания бальзама препарат готов для исследований. Изготовление временных препаратов При изготовлении временных препаратов изучаемый объект помещают на предметное стекло в каплю воды или глицерина, раствора реактива или красителя и накрывают покровным стеклом. Такой препарат хранят не более месяца. Препараты, которые можно хранить более длительный срок, называют постоянными. жүктеу/скачать 1,15 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|