Рибонуклеиновая кислота (РНК) в клетках печени лягушки
Фиксация смесью Карнуа; окраска: метиловый зеленый и пиронин
Здесь перед нами тот же объект, как и на препарате , но при другой фиксации и окраске, которые позволяют выделить как структуры, содержащие ДНК, так и части клеток, содержащие РНК- Элементы, содержащие ДНК, окрашиваются в синевато-зеленый цвет метиловым зеленым, а части клетки, содержащие РНК, окрашиваются в красный цвет пиронином. Изучить и зарисовать препарат следует при сильном увеличении.
Цитоплазма окрашена в красный цвет; ее неравномерная окраска указывает, что РНК больше в различных зернистых образованиях цитоплазмы. В круглых ядрах выделяются синевато-зеленые глыбки хроматина и хорошо заметно ядрышко, окрашенное в красный цвет. Эта окраска показывает, что РНК имеется не только в цитоплазме, но и в ядрышках. Проверкой заключения в местонахождении РНК в клетке служит метод Браше; срезы до окраски подвергают действию рибонуклеазы— фермента, разрущающего РНК. Если способные окрашиваться в красный цвет части клетки перестают окрашиваться после действия рибонуклеазы, это служит подтверждением наличия в таких структурах РНК.
Ферменты Щелочная фосфатаза в клетках канальцев первичной почки плода свиньи
Кальций-кобальтовый метод Гомори
Гистохимическое исследование ферментов основано на использовании в реакции субстрата, иначе говоря, инкубационной среды. Инкубация вызывает расщепление субстрата и выпадение осадка, который дополнительными химическими реакциями переводится в окрашенное соединение, видимое под микроскопом.
Интенсивность окраски и ее распространение дают возможность судить об активности и топографии фермента в клетках и тканях.
Литература:6, с.28-29;
Контрольные вопросы: 1 Какой краситель используется в качестве ядерного красителя?
2 Фиксация смесью Карнуа?
3 Для чего используют метод Браше?
