Этапы биотехнологического процесса
1. Подготовительный (предферментационный) этап: подготовка и стерилизация воздуха;
приготовление и стерилизация питательных сред;
приготовление посевного материала.
2. Основной (ферментационный) этап:
непосредственно получение биологически-активных веществ.
3. Конечный (постферментационный) этап:
выделение и очистка биопрепарата;
получение готовой продукции;
розлив, укупорка, этикетировка, упаковка готовой продукции
Подготовка и стерилизация воздуха
Стерильный воздух применяется:
в процессах культивирования для аэрации;
для вентиляции участков цехов стерильной зоны, где в асептических условиях проводят последние стадии очистки и фасовки готового продукта.
Способы стерилизации воздуха:
Обработка ультрафиолетовыми лучами
Фильтрация с помощью волокнистых и пористых материалов
Приготовление и стерилизация питательных сред
Назначение питательных сред:
поддержание оптимальных для роста клеток физико-химических условий (рН, рО2, рСО2 и т.д.);
обеспечение клеток питательными веществами для оптимизации процесса биосинтеза.
Состав питательных сред:
Вода очищенная
Смеси аминокислот, пуринов, пиримидинов (регуляция синтеза белков и нуклеиновых кислот).
Сыворотки (эмбриональная сыворотка крови, лошадиная сыворотка или очищенный экстракт куриных эмбрионов) (защита клетки от повреждения).
Ростовые факторы (митогены) (активация синтеза ДНК).
Источники углерода и энергии (глюкоза или ее комбинации с аспарагиновой или молочной кислотами; чаще продукты крахмалопаточного производства (меласса, гидрол, кукурузный экстракт, соевая мука и др.).
Mикро- и макроэлементы (входят в состав ферментов, участвуют в поддержании необходимого осмотического давления и значения рН, буферной ёмкости (фосфатно-бикарбонатные буферы) или регулируют гидрофильность цитоплазмы клетки).
Небольшие концентрации антибиотиков (поддержание асептических условий).
Способы стерилизации питательных сред:
Термическая стерилизация (периодическая и непрерывная)
Стерилизующая фильтрация
Приготовление посевного материала
Многоэтапное выращивание посевного материала –
обязательный принцип биотехнологического производства
Ферментационный этап
Основным аппаратурным элементом биотехнологического процесса является биореактор – ферментер.
Биореакторы предназначены для культивирования микроорганизмов, накопления биомассы, синтеза целевого продукта.
Биореакторы должны обладать следующими системами:
эффективного перемешивания и гомогенизации среды выращивания;
обеспечения свободной и быстрой аэрирования;
теплообмена, обеспечивающего поддержание оптимальной температуры внутри реактора;
пеногашения;
стерилизации сред, воздуха и самой аппаратуры;
контроля и регулировки процесса и его отдельных этапов.
Стерилизация биореакторов осуществляется острым паром
Виды биореакторов в зависимости от строения
реакторы с механическим перемешиванием;
барботажные колонны, через которые для перемешивания содержимого пропускают воздух;
эрлифтные реакторы с внутренней или внешней циркуляцией; перемешивание и циркуляция культуральной среды в них обеспечивается потоком воздуха, за счет которого между верхним и нижним слоями культуральной среды возникает градиент плотности.
Центральный процесс биотехнологического производства — биосинтез в ферментере (ферментационный процесс)
По характеру культивирования: поверхностный и глубинный
По принципу организации материальных потоков:
Периодический (единовременно загружают в ферментер все компоненты питательной среды и посевной материал; после чего совершается полный цикл ферментации),
Полупериодический (или регулируемый) (добавление субстрата, диализ),
Непрерывный (из ферментера непрерывно отбирают небольшие порции культуральной жидкости и одновременно в него же вносят такой же объем питательной среды),
Отъемно-доливной (из ферментера непрерывно отбирают большие порции культуральной жидкости и одновременно в него же вносят такой же объем питательной среды)
Многоциклический (по завершении ферментационного цикла при сливе культуральной жидкости в аппарате оставляют ее примерно 10%, затем в ферментер вносят 90% свежей питательной среды, и начинается новый ферментационный цикл).
Выделение и очистка биопрепарата
Дезинтеграция клеток – разрушение клеток
с целью выделения внутриклеточно локализованного вещества
Химические методы (обработка щелочью).
Биохимические методы (лизис с помощью ферментов лизоцим и ЭДТА).
Физические методы (немеханические (осмотический шок или быстрое многократное замораживание-оттаивание), механические (обработка УЗ, соударение, гомогенизация под давлением)
Очищение от клеточных элементов или культуральной среды
Сушка и консервирование препарата
Розлив, укупорка, этикетировка, упаковка препарата
Достарыңызбен бөлісу: |