А. Р. Рустенов, Н. Ж. Елеугалиева генетика практикумы
жүктеу/скачать 4,96 Mb. Pdf көрінісі
|
| Рестриктазалардың ІІ типі - рекомбинантты ДНҚ молекуласын
құрастыруда және оның құрамын анықтауда қолданылатын негізгі құрал. Бұл ферменттер топтары бір түрдің екі суббөліктерінен құралған. Эпимолекулярлық массалары 100 кДа шамасында. Олардың нуклеазалық белсенділіктері тек қана Мg 2+ иондары бар жерлерде ғана жүреді. Рестриктазалардың бұл типтері ДНҚ тібектеріндегі екінші симметриялық осьтері бар (палиндромдарды) 4-8 нуклеотидтерді тани алады. Рестриктазалар ДНҚ-ның қостізбектеріндегі фосфодиэфирлік байланыстарды гидролиздеу арқылы симметриялы немесе симметриясыз етіп кеседі. Симметриялы болса ДНҚ молекуласының кесіндісінде «тұқыл ұштар» пайда болады. ↓ 5`...ГТТ ААЦ...3` 3`...ЦААТТГ...5` ↑ Рестриктаза Нра І ↓ 5`...ГТТ ААЦ...3` 3`...ЦАА ТТГ...5` «тұқыл ұш» Рестриктазалардың симметриясыз кесуінде ДНҚ молекуласында «жабысқақ ұштарды» шығарады. ↓ 5`...Г ААТТЦ...3` 3`...ЦТТААГ...5` Рестриктаза Eco RІ ↑ 5`...Г ААТТЦ...3` 3`...ЦТТААГ...5` «жабысқақ ұш» ДНҚ кесілуі немесе модификациялануы сайт-нысананың жағдайына байланысты. Егер сайт-нысана толық метилденген болса, фермент онымен байланысқа түсіп сайт-нысананы диссоциациялайды, нәтижесінде оның 169 белсенділігі жойылады. Егер сайт-нысана жартылай метилденген болса, фермент метилденбеген тізбекті модификациялайды, ал жасуша-иенің метилденген ДНҚ-сы сақталып қалады. Егер сайт-нысана толық метилденбеген болса, оның тану және кесу реакциялары сақталады. Төменде жиі қолданылатын рестриктазалар және олардың рестрикциялық сайттары көрсетілген (кесте 19 ). Кесте 19. Рестриктазалар және олардың рестрикциялау сайттары жүктеу/скачать 4,96 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|