Қазақстан республикасы білім жəне ғылым министрлігі м. Ж. Еркебаев, Қ. С. Құлажанов, Д. Б. Тəттібаева, А. Ы. Мəуленов
1- кезең Денатурация (93-95 0 С) 2- кезең Праймерлерді күйдіру (50-65 0 С) ДНҚ
жүктеу/скачать 1,24 Mb. Pdf көрінісі
|
| 62
1- кезең Денатурация (93-95 0 С) 2- кезең Праймерлерді күйдіру (50-65 0 С) ДНҚ-ның ізделіп отырған фрагменттері 3- кезең ДНҚ тізбегінің синтезі (72 0 С) 4-сурет. Амплификация циклі ДНҚ-ның ізделіп отырған фрагментінің көшірмесін жеткілікті мөлшерде алу үшін амплификацияның 20-40 циклін жүргізеді. Амплификацияның бірінші циклінде түзілген ДНҚ-ның жаңа тізбектері екінші цикл үшін матрица қызметін атқарады, екінші циклде де ампли- кон деп аталатын ізделіп отырған ДНҚ-ның спецификалық фрагменті түзіледі. Амплификацияның келесі циклдерінде ампликондар жаңа тізбектерді синтездеу үшін матрица қызметін атқарады ( 5-сурет). 63 Осылайша, ерітіндідегі ампликондардың жинақталуы 2 n формула- сы бойынша жүреді, мұндағы, n – амплификация циклдерінің саны. Сондықтан егер бастапқы ерітіндіде тек бір екітізбекті ДНҚ молеку- ласы болса, 35 цикл ішінде ерітіндіде теориялық түрде ампликонның 30 млрд-тан астам молекуласы жинақталуы тиіс. Агарозды гельде фрагментті электрофорез əдісімен визуалды түрде анықтау үшін осы мөлшер жеткілікті болады. Шын мəнінде, амплификацияның жекелеген циклдерінің тиімділігі кейбір мəліметтер бойынша 78-97% құрайды. Сынамада реакция ингибиторлары болса, бұл мəн едəуір төмен болуы мүмкін, амплификацияның спецификалық өнімдерінің шынайы санын: А = М(1+Е) п , теңдеуі бойынша дəлірек анықтауға болады. Мұндағы, М – ДНҚ-нысаналарының бастапқы мөлшері; n –ам- плификация циклдерінің мөлшері; Е – реакция тиімділігі. ДНҚ-ның ізделіп отырған бөлімі 5-сурет. Амплификация өнімдерінің экспоненциалды түрде жинақталуы Амплификация процесінде, бастапқы тізбектегі ұзын фрагмент- тер де синтезделеді, бірақ олардың жинақталуы тек арифметикалық прогрессияда: 64 К=Мп формуласымен жүреді Мұндағы, К-амплификацияның ұзын өнімдерінің саны; п-циклдер саны. Осылайша, соңы праймерлермен шектелген спецификалық фраг- менттер алғаш рет екінші цикл соңында пайда болады, геометриялық прогрессияда жинақталады жəне кейінірек амплификация өнімдері арасында басымдықты иеленеді. жүктеу/скачать 1,24 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|