213
селекция). Әрбіркезеңді жеке – жеке қарастырайық.
Гендерді
алу.
Қажетті
генді келесі түрмен алуға болады: а) оны ДНҚ – дан бөлумен; б) химиялық -
ферментатитвті синтез жолымен; в) РНҚ тәуеді ДНҚ полимеразаның
(ревертозаның) көмегімен, оқшауланған матрицалық РНҚ – ның негізінде
жаңғыртумен.
Гендерді ДНҚ – дан бөлу. Оқшауланған ДНҚ бөлшектеуге
ұшыратады. Ол үшін, нуклеотидтердің белгілі тізбектеріне ие болатын,
үлескілерде ДНҚ ыдырауын өршітетін, рестрипциялық эндонуклеозаларды
пайдаланады. Қазіргі уақытта, 85 әртүрлі нуклеотидті тізбектерді танитын, 400
– ден астам рестриктазалар белгілі.
Ыдырау
нуклеотидті
жұптардың
танылатын үлескісінің ортасында жүруі мүмкін, сонда ДНҚ – дың екі
тармақшасы да бір деңгейде «қиылады». Түзілген бөлшектер екітармақты
(тұйық) ұштарға ие болады. Басқа рестриктазалар ДНҚ – ның тармақшаларын
ығыстырумен ыдыратады, сондықтан баспалдақ түзіледі. ДНҚ жіпшелерінің
бірі бір неше нуклеотидтерге шығыңқы болады. Біржіпшелі (жабысқақ) ұштары
түзіледі. Бір рестриктазаның әрекетімен алынған, ДНҚ – дың екі жабысқақ
бөлшегі кездессе, онда ұштық тізбектерінің әсерінен өзара әрекетте оңай түседі.
Қажет болғанда тұйық ұштары жабысқақтарға айналуы мүмкін. Ол үшін, тұйық
ұштарға, жабысқақ ұштар беретін, рестриктазаның тану үлескілерімен
екітізбекті тізбектілерді қосады. Жабысқақ ұштарымен нуклеотидті тізбектілік
болуы мүмкін: а) алдын – ала сол рестриктазамен өңделген, векторға қосылуы;
б) өзара комплементар ұштарды тігу жолымен сызықтық молекуладан
сақиналыққа түрленуі мүмкін. Рестриктазалардың көмегімен ДНҚ – дан
гендерді әдісі мәнді кемшіліктерге ие болған. Қажет генге сәйкес келетін, сол
бірүлескіні ДНҚ – дан кесіп алуға мүмкіндік беретін, рестриктазаларды таңдап
алу қиын. Қызықты генмен қатар, ДНҚ бөлшектреі, генді қолдануға кедергілер
келтіретін, артық нуклеотидті тізбектіліктерге де ие болады. Рестриктаза
нуклеотидті ген тізбектілігінің бөлігін ыдырата алады, нәтижесінде ген
функционалдық толық құндылығын жоғалтады.
Достарыңызбен бөлісу: