Культивирование – искусственное выращивание микроорганизмов. Используется для изучения свойств микроорганизмов и для диагностики инфекционных заболеваний.
Культивирование бактерий.
Для культивирования необходимо: 1) соответствующая среда; 2) правильно произведенный посев; 3) оптимальные условия: температура, влажность, аэрация (снабжение О2) или создание бескислородных условий для анаэробов; 4) определенной время для выращивания (чаще – 24 час).
Требования к питательным средам. а) среды должны быть питательными - содержать все необходимые для жизнедеятельности вещества;
б) иметь определенное значение рН; для большинства патогенных микробов оптимальным является рН 7,2-7,4;
в) обладать буферностью – содержать вещества, нейтрализующие продукты обмена микроорганизмов, для того чтобы не изменялось значение рН среды;
г) быть изотоничными - осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки;
д) быть стерильнымидля получения чистой культуры;
е) содержать достаточное количество Н2О, т.к. бактерии питаются по законам осмоса и диффузии;
ж) обладать определенным окислительно-восстановительным потенциалом, для аэробов rH2 – не ниже 10; для анаэробов – не выше 5;
з) быть прозрачными; Классификация питательных сред. По консистенции среды делят на:
а) жидкие: пептонная вода (ПВ), мясопептонный бульон (МПБ);
б) полужидкие: полужидкий мясопептонный агар (МПА) и др.;
в) плотные или твердые: МПА, мясопептонный желатин, свернутая сыворотка;
г) сыпучие: разваренное пшено, кварцевый песок;
д) сухие – гигроскопические порошки, выпускаемые промышленностью;
Для уплотнения сред используют агар, желатин или селикагель. Агар – полисахарид, выделенный из морских водорослей. Он образует в воде гели, которые плавятся при температуре 100 С и застывают при 45 С. К полужидким средам агар добавляют в количестве 0,5% (0,3-0,7%), к плотным – 1,5-2%.
По составу среды делят на:
а) естественные – натуральные продукты (яйца, овощи), животные ткани, желчь, сыворотка крови;
б) искусственные – среды, приготовленные из различных настоев или отваров с добавлением неорганических солей, углеводов, азотистых веществ;
в) синтетические – среды, приготовленные из определенных химических соединений в точно указанных концентрациях.
По назначению среды делят на:
а) основные (простые) – используют для культивирования многих видов микроорганизмов: ПВ, МПБ, МПА; на простых средах хорошо растут прототрофные бактерии; простые среды служат основой для приготовления ряда сложных питательных сред;
б) специальные (сложные) - используют для тех микроорганизмов, которые не растут на простых средах: сахарный МПБ, сахарный МПА, сывороточный МПБ и МПА, кровяной МПА, асцитический МПБ;
в) элективные (избирательные) – используют для определенных видов; создаются оптимальные условия для этих видов, а другие виды не растут или растут плохо: щелочная ПВ (для холерного вибриона), среда Сабуро (для грибов), желточно-солевой агар (для стафилококка), сывороточные среды – среда Ру и среда Леффлера (для дифтерийных коринебактерий), среда Китта-Тароцци (для анаэробов), среды с желчью (для тифо-паратифозных бактерий), среды с глицерином (для микобактерий туберкулеза);
г) дифференциально-диагностические среды используют для изучения биохимических свойств и дифференцировки (отличия) одного вида микроорганизмов от другого по его ферментативным свойствам: среды Эндо, Левина, Плоскирева, среды Гисса. Состав сред подбирается так, чтобы выявить характерные отличия ферментативных свойств одного вида от другого.