Углеродсодержащие пористые материалы в качестве
Определение общего «прямого» и «непрямого» билирубина в сыворотке крови
жүктеу/скачать 1,06 Mb.
|
| 2.8.3 Определение общего «прямого» и «непрямого» билирубина в сыворотке крови
Билирубин образуется в организме в результате распада гемоглобина эритроцитов в клетках ретикуло-эндотелиальной системы (печень, селезенка). Билирубин относится к группе желчных пигментов и является токсическим веществом. Он обезвреживается в клетках печени. Транспортируется билирубин к месту обезвреживания в комплексе с белком. В печени происходит процесс обезвреживания по схеме: Глюкурониды билирубина хорошо растворимы, они выводятся из печени по желчевыводящим путям. В сыворотке крови содержится два вида билирубина: нерастворимый (в виде комплекса с белками, обеспечивающими транспорт) и растворимый (диглюкуронид билирубина). Вместе обе формы составляют общий билирубин. Определение содержания билирубина в крови является важным диагностическим тестом. Билирубин обычно содержится в крови в небольших дозах (8–20 мкмоль/л), причем 75% из них составляет билирубин, связанный белками (нерастворимый) (5,7–15 мкмоль/л) и 25% – прямой билирубин (2–5 мкмоль/л). При различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия, концентрация билирубина повышается. Метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом. Этот продукт окрашен в малиново-красный цвет. Билирубин – диглюкуронид реагирует с диазосмесью непосредственно. Связанный с белками билирубин реагирует с диазосмесью после диссоциации белкового комплекса, которая достигается прибавлением к сыворотке кофеинового реактива. Определение билирубина в сыворотке крови В три пробирки (для общего билирубина, «прямого* и для контроля) вводят реактивы согласно таблице. Таблица 4. Определение билирубина в сыворотке крови
Для определения «прямого» билирубина колориметрирование следует проводить спустя 5—10 мин после добавления диазосмеси, так как при длительном стоянии в реакцию вступает «непрямой» билирубин. Для определения общего билирубина пробу для раз вития окраски оставляют стоять на 20 мин, после чего колориметрируют. При дальнейшем стоянии окраска не изменяется. Измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500–560 нм (зеленый светофильтр), в кювете толщиной 0,5 см против воды. Щ показателей, полученных при колориметрировании общего «прямого» билирубина, вычитают показатель контроля. Расчет производят по калибровочному графику. Находят содержание общего «прямого» билирубина. Для определения уровня «непрямого» билирубина вычитают из показателя общего его содержания показатель «прямого» билирубина. жүктеу/скачать 1,06 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|