Фармацевтическая

108
При указании на концентрацию раствора лекарственного вещества в про-
центах рассчитывается удельный показатель поглощения с использованием по-
казателя оптической плотности: 
1%
иссл.
1 см
.
(%)
D
E
C
L
=
×
Для расчёта значений показателей поглощения (погашения) растворов ле-
карственных веществ предварительно нужно подготовить по методике раство-
ры веществ, снять УФ-спектр, найти, при какой длине или длинах волн имеется 
максимум или максимум поглощения; при данной длине или длинах волн изме-
ряют значения оптических плотностей и рассчитывают коэффициенты погло-
щения (погашения) раствора вещества. 
В соответствии с ОФС 42-0042-07 спектрофотометрические измерения в 
ультрафиолетовой и видимой областях чаще всего проводят для растворов, хо-
тя такие измерения могут быть проведены и для веществ, находящихся в паро-
образном, жидком и твердом состоянии. Образец анализируемого вещества при 
спектрофотометрических определениях обычно растворяют в соответствующем 
растворителе. Для этих областей пригодны многие растворители, в том числе 
вода очищенная, спирты, хлороформ, низшие углеводороды, эфиры, разведен-
ные растворы аммиака, едкого натра, хлористоводородной или серной кислоты. 
Следует использовать растворители, не содержащие примеси, поглощающие в 
данной спектральной области. Для спектрофотометрии выпускаются специаль-
ные растворители, гарантирующие отсутствие примесей. 
Метод основан на свойстве лекарственных средств поглощать монохро-
матический свет в ультрафиолетовой области спектра. 
Спектрофотометры, предназначенные для измерений в ультрафиолетовой 
и видимой областях спектра, состоят из оптической системы, выделяющей мо-
нохроматическое излучение в области от 190 до 780 нм и обеспечивающей его 
прохождение через образец, и устройства для измерения оптической плотности. 
Основными частями этих приборов являются: 
1) источник излучения; 
2) диспергирующий прибор (призма или решетка); 
3) щель для выделения полосы длин волн; 
4) кюветы для образцов; 
5) детектор излучаемой энергии; 
6) встроенные усилители и измерительные приборы. 
1.4.1. ПРАВИЛА РАБОТЫ НА СПЕКТРОФОТОМЕТРЕ 
Прибор включается в сеть за 30 мин до начала эксперимента нажатием на 
клавишу «сеть» и кнопку «пуск». Температура воздуха в комнате должна быть 
постоянной, и равняться примерно 20
°
С, без колебаний температурных показа-
телей, так как колебания температуры воздуха в комнате будут влиять на ре-
зультат исследования. 
Конструкция спектрофотометра представлена на рисунках 52 и 53. 
108

109
а
 
 
 
 
 
 
б
 
Рис. 52.
Внешний вид некоторых спектрофотометров: 
а
— модель СФ-103; 
б
— различные модели спектрофотометров. 
Рис. 53.
Кюветное отделение спектрофотометра СФ-103 
Кюветы для спектрофотометрического определения должны иметь до-
пустимые отклонения в толщине слоя не более 
±
0,005 см. Кюветы, предназна-
ченные для испытуемого раствора и раствора сравнения, должны иметь одина-
ковое пропускание (или оптическую плотность) при заполнении одним и тем 
же растворителем. 
Ход
 
исследования
: 
1) взвешивают точную навеску фармацевтической субстанции на анали-
тических весах с точностью до 0,0005 г (рис. 54); 
Рис. 54.
Аналитические весы, разновес и мерная колба для приготовления раствора 
фармацевтической субстанции для разведения 
109

110
2) точную навеску фармацевтической субстанции через воронку перено-
сят в мерную колбу определённого объёма, как правило, на 100 мл (рис. 55); 
Рис. 55.
Перенос фармацевтической субстанции 
в мерную колбу для растворения 
3) добавление соответствующего растворителя к фармацевтической суб-
станции, который указан в нормативной документации на данную субстанцию 
при её анализе (рис. 56); 
Рис. 56.
Приливание растворителя к фармацевтической субстанции 
в мерной колбе № 1 
4) перемешивание раствора до полного растворения кристаллов порошка 
фармацевтической субстанции (рис. 57); 
Рис. 57.
Растворение кристаллов фармацевтической субстанции 
в мерной колбе № 1 
110

111
5) доводят объём раствора до метки на горловине мерной колбы таким 
образом, чтобы нижний мениск поверхности раствора был на одном уровне с 
меткой (рис. 58); 
Рис. 58.
Доведение объёма раствора 
до метки в мерной колбе № 1 
6) часть полученного раствора в мерной колбе № 1, как правило 1 мл, при 
помощи пипетки переносят в мерную колбу № 2 объёмом, как правило, также 
100 мл (рис. 59); 
Рис. 59.
Перенос части раствора из мерной колбы № 1 в мерную колбу № 2 
для получения разведения 
7) ко взятому объёму (аликвоте) от раствора в мерной колбе № 1 прибав-
ляют такой же растворитель (рис. 60); 
Рис. 60.
Через воронку ко взятой аликвоте прибавляют растворитель 
в мерной колбе № 2 
111

112
8) так же, как и на первом этапе исследования, объём раствора в мерной 
колбе № 2 доводят растворителем до метки; 
9) наливают полученный раствор из мерной колбы № 2 в кварцевую кю-
вету (рис. 61); 
Рис. 61.
Заполнение кварцевой кюветы анализируемым раствором 
из мерной колбы № 2 
10) раствор сравнения — растворитель, используемый для растворения 
фармацевтической субстанции и получения разведения в мерных колбах № 1 
и 2, а также анализируемый раствор в кварцевых кюветах помещают в кювет-
ное отделение спектрофотометра (рис. 62); 
Рис. 62.
Кварцевые кюветы с раствором сравнения (позиция «0») 
и анализируемым раствором (позиция «1») 
11) закрывают кюветное отделение и производят измерения (рис. 63); 
Рис. 63.
Кюветное отделение закрыто перед началом анализа 
112

113
12) в программе к спектрофотометру производят соответствующие 
настройки в таблице ввода параметров и настраивают параметры процесса из-
мерения (рис. 64); 
Рис. 64.
Настройка программы перед измерением 
13) перед измерением осуществляют прогрев дейтериевой лампы 
(рис. 65); 
Рис. 65.
Диалоговое окно программы спектрофотометра, 
сообщающее о прогреве дейтериевой лампы спектрофотометра с секундомером 
14) нажимают кнопку «измерение» (поглощение базовой линии раствора 
сравнения) (рис. 66); 
Рис. 66.
Диалоговое окно (фрагмент) с кнопками 
для запуска процесса измерения оптической плотности 
113

114
15) получен результат анализа в виде диаграммы (рис. 67); 
Рис. 67.
Диалоговое окно программы спектрофотометра, 
показывающее результат анализа в виде диаграммы 
16) диалоговое окно для ввода реквизитов по результату анализа (рис. 68); 
Рис. 68.
Диалоговое окно программы спектрофотометра, 
в котором заносятся сведения (реквизиты) об отчёте 
17) оформление отчёта о результатах анализа (рис. 69). 
ВАЖНО:
при анализе фармацевтической субстанции по показателю 
«подлинность» в кюветное отделение спектрофотометра помещают две кюветы 
с двумя растворами (раствор сравнения (растворитель) и анализируемый рас-
твор). При анализе фармацевтической субстанции по показателю «количест-
венное определение» в кюветное отделение спектрофотометра помещают три 
кюветы с растворами (раствор сравнения (растворитель), анализируемый рас-
твор и раствор стандартного образца (РСО) с известной концентрацией этой же 
фармацевтической субстанции). Используемые кюветы для спектрофотометри-
ческого анализа в ультрафиолетовой области спектра должны быть изготовле-
ны из кварцевого стекла, так как оно пропускает ультрафиолетовый свет, а 
обычное лабораторное стекло и органическое стекло не пропускают. 
114

115
Рис. 69.
Протокол о результатах анализа в электронном виде, 
который затем выводится на бумагу 
Приборы.
Фармакопея не указывает конкретные типы приборов, реко-
мендованные для выполнения измерений. В нашей стране применяются как 
отечественные, так и импортные приборы. Для обеспечения единства измере-
ний рекомендуется при эксплуатации прибора точно придерживаться установ-
ленных рабочих условий. Особенно важно обеспечить метрологическое обслу-
живание приборов в отношении их калибровки как по шкале длин волн, так и 
по фотометрической шкале. Это обслуживание, как правило, проводят соответ-
ствующие государственные метрологические организации. 
Факторы, влияющие на воспроизводимость и правильность резуль-
татов.
Для получения достоверных данных необходимо строго следовать ин-
струкции по уходу за прибором и его эксплуатации, обращать внимание на та-
кие факторы, как точность толщины кювет и их спектральная пропускаемость. 
Кюветы, применяемые для испытуемого и контрольного растворов, 
должны быть одинаковыми и иметь одну и ту же спектральную пропускае-
мость, если они содержат только один растворитель. В ином случае необходи-
мо внести соответствующую поправку. 
Особое внимание следует обращать на чистоту кювет. Нельзя касаться 
пальцами наружных поверхностей кюветы, на них не должна попадать жид-
кость (растворитель или испытуемый раствор). Следует также учитывать воз-
можные ограничения, связанные с использованием растворителей. Спектрофо-
тометрия в УФ-области широко используется для количественного определе-
ния лекарственных средств и включена во все современные фармакопеи. Чув-
115

116
ствительность метода определяется в основном способностью вещества к по-
глощению и выражается, как было указано выше, молярным коэффициентом 
поглощения. Предельные концентрации веществ, анализируемые при помощи 
спектрофотометрии, как правило, меньше, чем в титриметрических или грави-
метрических методах. Этим объясняется использование спектрофотометрии 
при определении небольших количеств веществ, особенно в различных лекар-
ственных формах. 
Основным условием для количественного анализа является соблюдение 
закона Бугера — Ламберта — Бера в пределе соответствующих концентраций. 
Для проверки соответствия закону строят график зависимости (поглощение — 
длина волны) или рассчитывают фактор для каждого стандартного раствора и 
определяют область концентраций, в пределах которой величина 
D
/
С
остается 
постоянной. 
Существуют и применяются два принципиально различных способа 
спектрофотометрических количественных определений. По одному из них 
содержание вещества в процентах рассчитывают на основании предварительно 
вычисленной величины поглощения, чаще по величине 
1%
1 см
:

жүктеу/скачать 66,35 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: