Жаныбекович Оптимизация условий трансформации картофеля Магистерский проект на соискание степени магистра технических наук по
жүктеу/скачать 7,32 Mb.
|
Каримов Нурлыбек антиплагиат
| Методы исследований
Нами были использованы следующие методы: -метод апикальных меристем, микрочеренкованияв условиях invitro растительного материала; - иммуноферментный анализ на обнаружение вирусных болезней, визуальный учет больных растений (вирусных и грибных болезней); - электрофоретическое разделение белков; - метод «биолистик»; - материалы Министерства сельского хозяйства, Управления статистики Акмолинской области. Оздоровление сортов картофеля от вирусов и других патогенов проводилось методом культуры апикальных меристем в условиях in vitro в сочетании с методом химиотерапии, при котором клубни предварительно выдерживали при температуре 37-38ОС в термостате (термотерапия) для ингибирования бактериальной и грибной инфекции в течение 5-7 дней. Ускоренное размножение оздоровленных пробирочных растений от широко распространенных в Казахстане мозаичных вирусов Х, М, Y, А, L проводили микроразмножением и его последующем выращивании в условиях закрытого, а затем открытого грунта [13]. В эксперименте исходный материал клубней отбирался из внешне здоровых кустов с явным отсутствием симптомов болезней. При этом учитывалось строгое соответствие морфофизиологических параметров выбранных образцов сортовым показателям. Для оздоровления клубней картофеля различных сортов апикальные меристемы из проросших в условиях термостата клубней при температуре 37-38ОС были вычленены в асептических условиях ламинар-бокса. В качестве питательной среды для культивирования апикальной меристемы использовали модифицированные нами растворы питательной среды Мурасиге-Скуга (МС), которые включают все необходимые растениям макроэлементы (азот, фосфор, калий, кальций, серу, магний, железо), микроэлементы (бор, цинк, медь, марганец и др.), а также витамины, углеводы, фитогормоны или их синтетические аналоги. В качестве источника углерода использовали сахарозу. В качестве ростовых регуляторов использовали кинетин, 6-бензиламинопурин (БАП) и индолилуксусную кислоту (ИУК) [12.13]. При достижении пробирочных растений высоты 10-12 см, они проверялись на наличие вирусной инфекции методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием набора ELISA. Это позволяет максимально исключить факторы, неблагоприятно влияющие на соматическую и генетическую стабильность сорта. жүктеу/скачать 7,32 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|