2 ЗЕРТТЕУ ОБЪЕКТІСІ ЖӘНЕ МАТЕРИАЛДАР
2.1 Зерттеу нысаны
1 Сурет - Ұлттық биотехнология орталығы
37
3 Зерттеу нәтижесі
3.1 Sorghum BICOLOR L. IN VITRO соматикалық жасушалар
мәдениеті
Зерттеу нысаны қант сорттары мен будандары болды: SUB-1, SUB-2,
SUB-3, SUB-10, SUB-11, Hybrid-1 және Hybrid-2.Донорлық өсімдіктер
Қазақстанның оңтүстік-шығысындағы Арид жағдайында қара қоңыр топырақта
өсірілді.Соматикалық жасушаларды бөлу үшін донорлық өсімдіктер сүт пісу
фазасына дейін өсірілді. Стерильді жағдайда жетілмеген ұрықтар 20 г/л
сахароза, 5 мг/л Fe-хелат, 100 мг/л мезоинозит, 2 мг/л 2,4-Д, рН-5,7 құрамында
болатын біздің модификацияларымен Мурасига-Скуга қоректік ортаға
бөлініп,орналастырылды.Қант құмырсқасының соматикалық жасушаларын 27
С қараңғыда өсірді.
Қантты құмай соматикалық клеткаларын өсіру кезінде каллус
клеткаларының қалыптасу жиілігіне және олардың морфологиясына донорлық
өсімдіктің бастапқы генотипі елеулі әсер етті (1 кесте).Каллусты тіндердің
пайда болу жиілігі бойынша жоғары көрсеткіштер Hybrid-2 (69,11 %), sab-3
(43,83 %), SABB-1 (42,31 %) және SAB-10 (40,32 %) генотиптерінде
анықталды.Каллусты тіндердің түзілу жиілігі бойынша орташа көрсеткіштер
SAB-11
және Hybrid-1 генотиптерінде анықталды, онда каллусты
жасушалардың түзілу жиілігі 36,70% құрады) және тиісінше 25,33 % құрады.
.
Каллус тіндерінің түзілуінің төмен көрсеткіші SAB-2 генотипінен табылды,
онда каллусогенез жиілігі 4,47 % құрады.(2-кесте.)
.
2 Кесте - Қант сорго соматикалық жасушалар мәдениетінде Каллусогенез
(Sorghum bicolor l.)
in vitro
№
Генотип
Оқшауланған
ұрықтардың саны
Алынған
каллустардың
саны
%
каллусо-
генеза
1
SABB-1
52
22
42,31
2
SAB-2
67
3
4,47
3
SAB-3
73
32
43,83
4
SAB-10
62
25
40,32
5
SAB-11
79
29
36,70
6
Hybrid-1
75
19
25,33
7
Hybrid-2
68
47
69,11
38
Қант соргының соматикалық жасушаларынан алынған каллустар
морфологиясы мен морфогенетикалық потенциалы бойынша ерекшеленді
Алынған каллустардың көпшілігі негізінен бос паренхимиялық
жасушалардан тұрды (2-сурет).
2 Сурет - Мәдениетте алынған морфогенді емес бос каллустар қантты
құмай
Sorghum bicolor L
Қант соргының соматикалық жасушаларын өсіру кезінде генотиптердің
көпшілігі үшін негізгі проблема in vitro өсірудің жетінші-оныншы күні
соматикалық жасушалармен бөлінетін фенолдық қосылыстар болып табылады.
Фенольды қосылыстар-хош иісті сақинаның бір немесе бірнеше гидроксильді
топтары бар хош иісті табиғат заттары [Harborne, Williams,1992]. Оларды хош
иісті сақиналардың санына және оларға қосылған көміртегі атомдарының
санына байланысты жіктейді және үш үлкен топқа бөлінеді: бір және екі хош
иісті сақиналары бар, сондай-ақ полимерлік фенолдық қосылыстар.Кейде
ерекше топқа димерлік фенол қосылыстары бөлінеді. Фенольды қосылыстар
Өсімдіктердің өсуіне күшті әсер етеді, тұқымдардың өсуін, сабақтар мен
тамырлардың ұзаруын тежейді. Сонымен қатар олар фитонцидтік қасиеттерге
ие және өсімдіктердің саңырауқұлақ, әсіресе бактериялық инфекцияға
иммунитеті қамтамасыз етеді. Фенолдық қосылыстардың түзілуін тежеу үшін
қоректік ортаға белсендірілген көмір, аскорбин қышқылы және кремний
диоксиді қосылады. Фенолдар жасушалардың некрозының негізгі себебі болып
табылады және қант сорго in vitro каллус жасушаларының өсуіне кедергі
жасайды. Сондықтан біз генотиптерді жеке зерттейміз, олар қарқынды
39
бөлінетін меристематикалық жасушалары бар тығыз тіндерден тұратын
морфогенді каллустарды қалыптастыруға қабілетті болды (3-сурет).
3 Сурет - Морфогенные каллусы алынған мәдениет соматикалық
жасушалардың in vitro қант құмай (
Sorghum bicolor L.
).
Тығыз морфогенді каллустардың ақ түсі болды және жаңа қоректік ортаға
пассирлеу кезінде қарқынды бөлуге және көбейтуге қабілетті болды. Қантты
сорго соматикалық жасушалар культурасында морфогенді каллустардың пайда
болу жиілігін зерттеу кезінде келесі генотиптер анықталды: Hybrid-2 және SAB-
3, мұнда морфогенді каллустардың пайда болу жиілігі тиісінше 27,94 % және
23,28 % құрады (3-кесте).
3 Кесте -
Sorghum bicolor L.
соматикалық жасушалар мәдениетінде
морфогенді каллустардың пайда болу жиілігі.
№
Генотип
Оқшауланған
ұрықтардың саны
Алынған
морфогендердің саны
каллус
%
Морфогенді
каллустың жетілуі
1
SABB-1
52
9
2,99
2
SAB-2
67
0
0
3
SAB-3
73
17
23,28
4
SAB-10
62
8
12,90
5
SAB-11
79
6
7,59
6
Hybrid-1
75
12
16,0
7
Hybrid-2
68
19
27,94
40
Қант құмайының соматикалық жасушаларының өсірілуі кезінде
морфогенді каллустардың пайда болу жиілігінің орташа көрсеткіштері Hybrid-1
және SAB-10 генотиптерінде анықталды, онда морфогенді каллустардың пайда
болу жиілігі тиісінше 16,0 % және 12,90 % құрады.Қантты құмырсқа (2 мг/л
2,4-Д) қоректік ортадағы соматикалық жасушалардың өсірілуі кезінде
морфогенді каллустардың түзілуінің төмен көрсеткіштері SAB-11 және SABB-1
генотиптерінде анықталды, онда морфогенді каллустардың түзілу жиілігі 7,59
% және 2,99 % құрады. Біздің тәжірибемізде SAB-2 генотипінде in vitro
соматикалық жасушаларды өсіру кезінде морфогенді каллустардың пайда
болуы табылған жоқ.Осылайша, біз Қазақстанның оңтүстік-шығыс жағдайында
өсірілген қант сорго in vitro соматикалық жасушаларын өсіру кезінде каллус
түзілу жиілігі бастапқы генотипке байланысты екенін анықтадық.
5 Сурет - Қант соргосының (
Sorghum bicolor L
. ) өсу кезеңдері
Сондай-ақ, қоршаған ортаның биотикалық және абиотикалық стресстік
факторларына төзімділікке жасушалық селекцияда қолдануға болатын
морфогенді каллустарды қалыптастыруға қабілетті қант құмырсқасының
генотиптері анықталды.Қазақстанның оңтүстік-шығыс жағдайында өсірілген
қант құмай (Sorghum bicolor l.) соматикалық жасушаларын өсіру бойынша
зерттеу нәтижелері келтірілген
|