Нәтижені бағалау:
Ерітінді түсін бақлайды және қайсы пробиркада активатор мен ингибиторлар әрекеттескенін анықтайды. Жұмыс нәтижесін кесте түрінде көркемдейді.
Сипаттама
|
Субстрат
|
Фермент
|
Йодпен реакцияласуы
|
Сумен
|
Мыс суль фатымен
|
Натрий хлоридімен
|
Боялуы
|
крахмал
|
амилаза
|
|
|
|
Реакция
|
|
|
|
Ыдырау өнімі
|
|
|
|
рН ортаның фермент активтілігіне әсері.
Принципі:
Сілекей амилазасына рН ортаның оптималды мағынасы – 6,8. Қышқыл және сілтілі ортада белсенділігі төмендейді, және крахмалдың ыдырауы толық емес декстрин кезеңіне дейін болады, ол иод ертіндісімен қызғыш-күлгін немесе қанық қызыл бояу береді.
Реактивтер:
1) крахмал1% ертіндісі;
2) сілекей, 10 есе сұйылтылған ерітінді;
3) тұз қышқылы НСІ, 0,2% ерітінді;
4) йод, 1% ерітінді;
5)
Іс-қимыл алгоритмі:
1.8 химиялық пробиркалар алып номерлеңіз;
2. 8 номерленген пробиркаға 1 мл дистилденген су құйыңыз;
3. 1-ші пробиркаға 1 мл тұз қышқылы құйып, араластырыңыз;
4. 1-ші пробиркадан 1 мл қоспа алып 2 ші пробиркаға құйыңыз;
5. 2-ші пробиркадағының араластырып, 1 мл қоспа алып 3-ші пробиркаға құйыңыз т.с.с.басқа пробиркаларға қосып шығыңыз;
6. 8 ші пробиркадан 1 мл қоспаны төгіп тастаңыз. Осылай пробиркаларда тұз қышқылының ертіндісінің рН ортаның әртүрлі мағынасына сәйкес кему концентрациясын алады.
7. Осыдан кейін әрбір пробиркаға 2 мл крахмал ертіндісін және 1 мл сілекей ертіндісін қосады.
8. Пробиркаларды сілкіп, және 37ºС термостатқа 15 минутқа қойыңыз;
9. Кейін ағын су астында суытып 1 тамшыдан иод ертіндісін қосыңыз.
Нәтижені бағалау:
Тұз қышқылының қандай концентрациясында крахмалдың толық гидролизін (рН орта) бақылайды.
АЛАНИНАМИНОТРАНСФЕРАЗАНЫ АНЫҚТАУ (АлАТ)
Мақсаты:
- АлАТ ферменті активтілігін анықтау әдісін үйрену;
Көрсетпесі:
- бауыр және жүрек ауруларының дифференциалды диагностикасы;
Принципі:
Аланинаминотрансфераза (АлАТ) L-аланин және α-кетоглутарат арасындағы реакцияны катализдейді, нәтижесінде олар L-глутамат және пирожүзім қышқылы тұзына айналады. L-аланин + α-кетоглутарат пирожүзім қышықылы және L-глутамат. Сынамадағы пируват мөлшерін фотометриялық анықтау 2,4-динитрвинилгидрозин реакциясына негізделген. Анықтау сілтілік ортадағы пирожүзім қышқылы гидрозондарының оптикалық тығыздығын өлшеуге негізделген.
Рессурстар:
1) реактивтер жиынтығы (Витал);
2) КФК, толқын ұзындығы -500-560 нм, кювета – 1 см;
3) калибрлік кесте;
4) термостат;
5) лаб.ыдыс (1, 0,1 мл пипеткалар, химиялық пробиркалар);
6) штатив,
7) анализ нәтижесін тіркейтін журнал,
8) бланкілер;
9) резеңке қолғаптар
Достарыңызбен бөлісу: |
