Клиникалық зертханалық зерттеу әдістері пәнінен Іс-дағдылар стандарттары Мамандық
жүктеу/скачать 0,61 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- ІІ. Калибрлік кестені құру
- Есептеу
- АлАТ = Етәж.сын х к
- Қалыпты көрсеткіш
- Көрсетпесі: - Жүрек және бауыр ауруларының дифференциялдық диагностикасы; Принципі
- Реактивтер: Реагент №1. Субстратты қоспа.
- Реагент №3. Калибратор Натрий пируваты...........................................................................1,0 ммоль/л Реагент №4. Ащы натр
- Биоматериал
- Іс-қимыл алгоритмі: 1. Анализді жүргізу
- Пробикілерді қойыңыз Тәжірибе сынамасы, мл Бақылау сынамасы, мл
7. Араластырыңыз, 20 минутқа бөлме температурасында (20-25гр)қалдырыңыз 8. Екі пробиркаға да 5 мл-дан 0,4 моль/л NаОН ертіндісін қоыңыз; 9.Араластырыңыз және 5-10 минуттан кейін бақылау ертінлдісіне қарсы фотометрлеңіз, толқын ұзындығы 500-560 нм кювета қалыңдығы 1 см. ІІ. Калибрлік кестені құру: 1) 7 дана химиялық пробиркаларды алып номерлеңіз (1,2,3,4,5,6, және бақылау); 2) Калибраторларды құйыңыз 1-ші пробиркаға -0,05 мл, 2-шісіне- 0,10 мл, 3-шісіне- 0,15 мл, 4-шісіне- 0,20 мл, 5-шіге – 0,25 мл, 6-шысына – 0,30 мл 3) Дистилденген суды құйыңыз 1-ші пробиркаға 0,55 мл; 2-шісіне - 0,50 мл; 3-шісіне - 0,45 мл, 4-шісіне - 0,40 мл, 5-шісіне - 0,35 мл 6-сына - 0,30 мл Бақылау пробиркаға - 0,60 мл 4) Барлық пробиркаларға 0,5 мл-дан 2,4 ДНФГ ерітіндісін қосады
5. Пробирка ішіндегісін араластырыңыз және 20 минуттан соң (20-25◦С) 0,4 мл/л NаОН ертіндісін 5 мл-ден қоыңыз; 5-10 минуттан соң дистилденген суға қарсы фотометрлеңіз, толқын ұзындығы 500-560 нм., кювета қалыңдығы 1 см. Есептеу қан сарысуындағы фермент активтілігінің есебін калибрлік кестемен есептейді. 1. Калибрлік кестемен коэфициентті к есептеңіз: к= С/*Е, Е = (Екал- Ек), мұнда: Екал – калибрлік сынама экстинкциясы, Ек – бақылау экстинкциясы. С – АлАТ (активтілігі) каталитикалық концентрациясы калибрлік сынамада мкмоль/л немесе ммоль/л. 2. АлАТ(активтілігі) каталитикалық концентрациясы мкмоль/л немесе ммоль/л –де мына формуламен есептейді АлАТ = Етәж.сын х к, мұнда к – калибрлік кесте бойынша есептелген коэфициент, Етәж.сын – бақылауға қарсы өлшенген тәжірибе сынамасы экстинкциясы. Ескерту: Егер АлАТ белсенділігінде 3 ммоль/л = 0,834 мкмоль/л – ден жоғары болса қан сарысуын сұйылту керек. Белсенділікті есептеуде сұйылту дәрежесін ескеру керек, кейбір жағдайда сұйылтылған сарысуда сұйылту дәрежесімен АлАТ белсенділігі арасында пропорционалдық болмауы мүмкін. Қалыпты көрсеткіш: АлАТ – 0,1 – 0,68 ммоль/л немесе 0,028 – 0,19 мкмоль/л АСПАРТАТАМИНОТРАНСФЕРАЗАНЫ АНЫҚТАУ (АсАТ) Мақсаты: - АсАТ ферментінің активтілігін анықтау әдісін меңгеру; Көрсетпесі: - Жүрек және бауыр ауруларының дифференциялдық диагностикасы; Принципі: Аспартатааминотрансфераза АсАТ L – аспартат және α – кетоглутарат арасындағы реакцияны катализдейді, нәтижесінде олар L – глутамат және оксалоацетатқа айналады. Сынамадығы оксалоацетат мөлшерін 2,4-динитрвинилгидрозин реакциясына негізделіп фотометрлеумен анықтайды. Анықтау сілтілі ортадағы α – оксоглутарлы қышқыл гидразондардың оптикалық тығыздығын өлшеуге негізделген. Рессурстар: 1) реактивтер жиынтығы (Витал); 2) КФК, толқын ұзындығы -500-560 нм, кювета – 1 см; 3) калибрлік кесте; 4) термостат; 5) лаб.ыдыс (1, 0,1 мл пипеткалар, химиялық пробиркалар); 6) штатив, 7) анализ нәтижесін тіркейтін жұмысшы журнал, 8) бланкілер; 9) шыныға жазатын қарандаш; 10) резеңке қолғаптар. Реактивтер: Реагент №1. Субстратты қоспа. DL – аспарагин қышқылы............................................................0,1 моль/л; α-кетоглутарат қышқылы ............................................................2,0 ммоль/л; фосфатты буфер, рН 7,4.............................................................0,1 моль/л Реагент №2. 2,4 ДНФГ 2,4 – динитрофенилгидрозин......................................................1,0 ммоль/л Тұз қышқылы.................................................................................1,0мол/л Реагент №3. Калибратор Натрий пируваты...........................................................................1,0 ммоль/л Реагент №4. Ащы натр...............................................................4,0 моль/л Биоматериал: гемолиз ізі жоқ балғын қан сарысуы Жұмысшы ерітіндісін әзірлеу: Натрий гидрототық ерітіндісі: 1. 4 –ші флакон ішіндегісін 10 рет карбонаттсыз бидистелденген суда сұйылту; Іс-қимыл алгоритмі: 1. Анализді жүргізу 1. 2 пробирканы алыңыз; сынама және бақылау; 2. Екі пробиркігеде 0,5 мл субстрат-буфер ертіндісін өлшеп құйыңыз; 3. сынамаға 0,1 мл қан сарысуын құйыңыз;
4. су моншасында 30 минут 37◦С инкубациялаңыз; 5. Екі пробиркаға да 0,5 мл 2,4 ДНФГ ерітіндісін қосыңыз; 6. бақылау пробиркасына 0,1 мл қан сарысуын қосыңыз;
жүктеу/скачать 0,61 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||