Лабораторная работа Физиология растительной клетки. Опыт Обнаружение тонопласта
жүктеу/скачать 133,5 Kb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Опыт 1. определение изоэлектрической точки белка
- Вопросы для самостоятельного изучения: Размеры изоэлектрической зоны у различных белков.
- Лабораторная работа 6. Исследования ферментов растительной клетки . Вопросы для коллективного обсуждения
- Опыт 2. Обнаружение амилазы в прорастающих семенах
- Опыт 3.Обнаружение дегидраз .
| Лабораторная работа 5.
Определение изоэлектрической точки тканей корня. Вопросы для коллективного обсуждения: Полярные группировки белковых молекул Значение уровня рН для поддержания активности ферментов. Понятие «изоэлектрическая точка» Опыт 1. определение изоэлектрической точки белка Приготовьте по 10 мл буферных растворов с рН 2,2; 3,6; 4,0; 4,6; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0., разлейте их по пробиркам и пронумеруйте. С корешка проростка на расстоянии 1-3 см от кончика сделайте не очень тонкие, но строго поперечные срезы. В одну фарфоровую чашку наливают 2-3 мл 0,1 % р-ра эозина, в другую- столько же 0,01% раствора метиленовой сини. Из воды срезы кисточкой переносят в р-р эозина на 10 мин, срезы окрашиваются в красный цвет. Из эозина без промывки перенесите их в раствор метиленовой сини на 10 мин, затем- в дистиллированную воду. Все срезы должны быть синими. В каждую чашку с буфером поместите по два среза, выдержите 1ч, затем рассмотрите срезы в микроскоп в капле соответствующего буфера. В растворе рН которого соответствует изоэлектрической точке срезы будут бесцветными или фиолетовыми. В результате гетерогенности белков клетки зона ИЭТ может расширяться. Вопросы для самостоятельного изучения: Размеры изоэлектрической зоны у различных белков. Литература: Полевой В.В. Физиология растений. М.: Высшая школа. 1989. 464 с. Якушкина Н.И. Физиология растений. М:. Просвещение. 1980. 303 Лабораторная работа 6. Исследования ферментов растительной клетки. Вопросы для коллективного обсуждения: Ферментативный катализ Классификация ферментов Опыт 1. Гидролиз жира липазой. Наклюнувшиеся семена подсолнечника очистите и разотрите в ступке. Отвесьте на часовом стекле три порции по 1г, поместите в пронумерованные конические колбы. Прилейте во все колбы по 10 мл дистиллированной воды, взболтайте, в колбу №1 прилейте 2 мл 0,1 н р-р уксусной кислоты для создания кислой среды рН=5 ( рН р-ра проверьте с помощью индикаторной бумаги). Содержимое колбы №№ прокипятите в течение 5 мин., после охлаждения добавьте 2 мл уксусной кислоты. Внесите во все колбы в качестве антисептика по 5 кап толуола. Поставьте в термостат при температуре 25-30 0С. Через сутки в колбу №2 прилейте 2 мл р-ра уксусной кислоты, во все колбы внесите по 5 мл этанола, по 4-5 кап р-ра тимолфталеина и оттитруйте 0,1 н р-ром NaOH до появления окраски, не исчезающей через 1 мин. В отдельной колбе оттитруйте 2 мл уксусной кислоты, чтобы определить, сколько щелочи требуется для ее нейтрализации. Опыт 2. Обнаружение амилазы в прорастающих семенах Несколько непроросших семян гороха разрежьте пополам, слегка смочите водой и разложите пинцетом на одной половине пластины из крахмального агара поверхностью среза вниз. На другой половине разложите несколько проросших семян. Закройте крышкой и оставьте на час, затем снимите семена и осторожно залейте пластинку слабым раствором йода. Опыт 3.Обнаружение дегидраз. Очищенные семена гороха разрежьте на две части, Одну часть кипятите в воде в течение 10 мин, затем обе части поместите в р-р метиленовой сини на 5-10 мин. Окрашенные семена промойте, разложите в пробирки с водой. Для создания анаэробных условий залейте поверхность воды тонким слоем масла. Поставьте пробирки на водяную баню при температуре 40 0С. Через некоторое время семена теряют синюю окраску, так как кислород, активированный дегидразами, восстановил метиленовую синь. У мертвых семян обесцвечивания не происходит. Выложите обесцвеченные семена из пробирки в чашку Петри. Наблюдается восстановление синей окраски при доступе воздуха. жүктеу/скачать 133,5 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|