Микробиология
Серологиялық типтерін анықтау
жүктеу/скачать 5,08 Mb. Pdf көрінісі
|
BulashevAK BMB.pdf
| Серологиялық типтерін анықтау.
Шыны тҥтіктердегі қиғаш қатырылған ЕПА-да 18-20 сағат бойы, 37ºС-та ӛсірілген ішек таяқшалары физиологиялық ерітінділермен шайылып, стерильді шыны тҥтіктерге ауыстырылады. Шайындыны 100ºС температурада 1 сағат бойы су моншасында қыздырады. Мҧндай жағдайда термолабильді L- және B-антигендері талқандалады, ал термостабильді А-антигенді талқандау ҥшін 120ºС-та 2 сағат бойы автоклавта ҧстайды. Қыздырылған бактериялардың суспензиясы бар шыны тҥтіктерді центрифугаға орналастырып, 10-15 минут бойы 2000-3000 айналымда тҧндырады. Осы тҧнбаны зат шынысының бетінде қойылатын агглютинация реакциясында (АР) антиген ретінде қолданылады. Антигеннің қалған бӛлігін оптикалық стандарт бойынша, 1 мл-де 500 млн. микрб жасушасы болатындай етіп, стерильді физиологиялық ерітіндімен сҧйылтқаннан кейін, оны шыны тҥтіктерде қойылатын АР- да қолданады. E. coli- дің серотоптарын анықтау ҥшін зат шынысына поливалентті топтық қан сарысуларын тамызғаннан кейін, оның ҥстіне бактериологиялық ілмекпен центрифугаланған бактерия тҧнбасын қосып, араластырады. Реакция нәтижесін 3 минуттан соң оқиды. Оң реакцияда сҧйықтық мӛлдірленеді және ҧсақ тҥйіршікті агглютинат 136 пайда болады. Теріс нәтижеде тамшы еш ӛзгеріссіз қалады. Поливалентті қан сарысуларының бір тобымен желімделген антигенді 1:10 қатынасында сҧйылтылған сол топтың моновалентті қан сарысуларымен қайталап тексереді. Осында оң нәтиже кӛрсеткен антигенді шыны тҥтіктердегі АР-да 1 мл кӛлемінде қояды. Моновалентті қан сарысуын 1:25 сҧйылтымынан бастап этикеткада кӛрсетілген титрге дейін сҧйылтады. Әуелі бірінші шыны тҥтікте қан сарысуының бастапқы сҧйылтымы дайындалады: 2,4 мл физиологиялық ерітіндіге 0,1 мл моновалентті қан сарысуы қосылады. Қалған шыны тҥтіктерге 0,5 мл- ден физиологиялық ерітінділер қҧйылады. Бірінші шыны тҥтіктегі (1:25) қан сарысуынан 0,5 мл алып, оны екінші шыны тҥтікке қҧйып, араластырғаннан кейін, оның 0,5 мл-і ҥшінші тҥтікке ауыстырылады, ҥшіншіден – тӛртіншіге солай т.б., соңғы шыны тҥтіктен 0,5 мл сҧйықтықты, ал бірінші шыны тҥтіктен 1,5 мл-ді алып тастайды. Сосын барлық шыны тҥтіктерге 0,5 мл-ден зерттеуге алынған антиген қосылады. Қосымша бақылау қойылады: 1) антиген + физиологиялық ерітінді (жалған агглютинация болмау ҥшін); 2) 1:25 қатынасындағы қан сарысуы (флокуляцияның болмауы ҥшін). Барлық шыны тҥтіктерді шайқап, 37ºС-қа реттелген термостатта 16-18 сағат ҧстайды, сонан соң бӛлме температурасында 6-8 сағат қалдырады. Реакция нәтижесі агглютиноскоп кӛмегімен тӛрт кресттік баға бойынша оқылады. E. coli -дің жүктеу/скачать 5,08 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|