Микробиология
Тышқандардың жілік майынан В-лимфоциттерді бӛліп алу
жүктеу/скачать 5,08 Mb. Pdf көрінісі
|
BulashevAK BMB.pdf
- Бұл бет үшін навигация:
- Тышқанның тимусынан Т-жасушаларды бӛліп алу.
| Тышқандардың жілік майынан В-лимфоциттерді бӛліп алу.
Тышқанды эфир немесе хлороформ кӛмегімен ҧйықтатады. Тышқанның денесін спиртпен ӛңдеп, табаның пинцетпен ҧстап тҧрып, табан сҥйегінің айналасынан қайшымен тілік жасап, пинцетпен терісін жамбас тҧсына дейін сыдырады. Қайшымен тізе буының маңындағы бҧлшық етті тіліп, скальпельмен жамбас аумағына дейін бҧлшық еттен жалаңаштайды. Содан кейін тізе буынының аймағынан қайшымен аяғын кесіп алып, тізе буыны тҧсынан сирағын табанымен қоса бӛліп алады. Ҥлкен сан жілігін Петри шынысына салып, скальпельдің кӛмегімен бҧлшық ет қалдықтарынан тазалап, тізе және жамбас буындарының тҧсынан эпифизді бӛліп алады. Бҧлшық еттен тазартылған сҥйектен шприцтің кӛмегімен майын сорып алып, мҧз салынған стаканға салады. Сонан соң жілік майын Поттер гомогенизаторымен ҧсақтайды. Пайда болған қоймалжыңды 4 қабатты стерильді капронды фильтрмен сҥзіп, жасушаларды Горяев камерасымен санайды. Әдетте тышқанның екі сан жілігіндегі жілік майында 20 млн лимфоидты жасушалар (В-лимфоциттер) болады. Тышқанның тимусынан Т-жасушаларды бӛліп алу. Эфирмен жансыздандырғаннан кейін тышқан ҧшасын арқасымен жатқызып, қҧрсақ аумағын спиртпен ӛңдейді де, ақ жол сызығының бойымен 98 терісін тіледі. Қҧрсақ аумағының терісін сыдырып ашып, препаровальды инелердің кӛмегімен бекітеді. Кеуде қуысының оң және сол жақ аумағынан астыңғы қабырғаларды бҧғанаға дейін қайшымен екі тілік жасайды. Тіліктердің бір-бірінен ара қашықтығы 3-4 мм болуы керек. Кеуде қуысына жасалған тілікті пинцеттің кӛмегімен ашады. Осы кезде жҥрек маңында орналасқан екі бӛлікке бӛлінген тимусты айқын кӛруге болады. Тимус ет ҧлпасына жақсы бекітілген, сол себепті пинцеттің кӛмегімен абайлап ажыратып алу қажет. Ажыратып алынған тимусты мҧзы бар Петри шынысына салып, скальпелдің және пинцеттің кӛмегімен тимусты дәнекер капсуладан тазартқан кезде ол екі бӛлікке бӛлінеді. Тимусты салқын стерильді ортада гомогенизациялап, пайда болған қоймалжыңды 4 қабатты капронды фильтрдің кӛмегімен сҥзіп, Горяев камерасымен тимус жасушаларын (тимоциттер) санайды. Әдетте бір тышқаннан 80 млн-ға жуық тимоциттерді алуға болады. жүктеу/скачать 5,08 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|