О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология

полевая диафрагма окуляра; 11 - окуляр; 12 - глаз; б - принцип освещения по 
Кёлеру: 1 - источник света; 2 - коллектор; 3 - полевая диафрагма; 4 - 
светофильтр; 5 - апертурная диафрагма; 6 - конденсор; 7 - объект; 8 - 
объектив 
Увеличение микроскопа можно определить, умножая увеличение объектива 
на увеличение окуляра (обычно увеличение объектива и окуляра указано на 
оправе: объектива до 100×, окуляра - 4×, 5×, 7×, 10×, 12,5×, 15× и 20×). 
Однако увеличение не определяет качества изображения. Качество 
изображения, его четкость определяется разрешающей способностью 
микроскопа, т. е. возможностью различать раздельно две близко 
расположенные точки. Предел разрешения - минимальное расстояние, на 
котором эти точки еще видны раздельно, - зависит от длины волны света, 
которым освещается объект, и числовой апертуры объектива. Числовая 
апертура в свою очередь зависит от угловой апертуры объектива и показателя 
преломления среды, находящейся между фронтальной линзой объектива и 
препаратом. Угловая апертура - это максимальный угол, под которым могут 
попадать в объектив лучи, прошедшие через объект. Чем больше апертура и 
чем ближе показатель преломления среды, находящейся между объективом и 
препаратом, к показателю преломления стекла, тем выше разрешающая 
способность объектива. 
Различают полезное и бесполезное увеличение. Полезное увеличение 
обычно равно числовой апертуре объектива, увеличенной в 500-1000 раз. 
Более высокое окулярное увеличение не выявляет новых деталей и является 
бесполезным. 
В зависимости от среды, которая находится между объективом и 
препаратом, различают "сухие" объективы малого и среднего увеличения (до 
40×) и иммерсионные с максимальной апертурой и увеличением (90-100×). 
Особенностью иммерсионных объективов является то, что между 
фронтальной линзой такого объектива и препаратом помещают 
иммерсионную жидкость, имеющую показатель преломления такой же, как 
стекло (или близкий к нему), что обеспечивает увеличение числовой апертуры 
и разрешающей способности объектива. 
В качестве иммерсионной жидкости для объективов водной иммерсии 
используют дистиллированную воду, а для объективов масляной иммерсии - 
кедровое масло или специальное синтетическое иммерсионное масло. 
Недостатком кедрового масла является его быстрое загустевание. Для 
объективов, работающих в ультрафиолетовой области спектра, в качестве 
иммерсионной жидкости используют глицерин. Изображение, полученное с 
помощью линз, обладает различными недостатками: сферической и 
хроматической аберрациями, кривизной поля изображения и др. В объективах, 

состоящих из нескольких линз, эти недостатки в той или иной мере 
исправлены. В зависимости от степени исправления этих недостатков 
различают объективы ахроматы и более сложные апохроматы. Соответственно 
объективы, в которых исправлена кривизна поля изображения, называются 
планахроматами и план апохроматам и. Использование этих объективов 
позволяет получить резкое изображение по всему полю, тогда как 
изображение, полученное с помощью обычных объективов, не имеет 
одинаковой резкости в центре и на краях поля зрения. Все характеристики 
объектива обычно выгравированы на его оправе: собственное увеличение, 
апертура, тип объектива (АПО - апохромат и т. п.); объективы водной 
иммерсии имеют обозначение ВИ и белое кольцо вокруг оправы в нижней ее 
части, объективы масляной иммерсии - обозначение МИ и черное кольцо. 
Все объективы рассчитаны для работы с покровным стеклом толщиной 0,17 
мм. Толщина покровного стекла особенно влияет на качество изображения при 
работе с сильными сухими системами (40×). При работе с иммерсионными 
объективами нельзя пользоваться покровными стеклами толще 0,17 мм 
потому, что толщина покровного стекла может оказаться больше, чем рабочее 
расстояние объектива, и в этом случае, при попытке сфокусировать объектив 
на препарат, может быть повреждена фронтальная линза объектива. 
Окуляры состоят из двух линз и тоже бывают нескольких типов, каждый из 
которых применяется с определенным типом объектива, дополнительно 
устраняя недостатки изображения. Тип окуляра и его увеличение обозначены 
на его оправе. 
Конденсор предназначен для того, чтобы сфокусировать на препарате свет 
от осветителя. Он состоит из нескольких линз, превращающих параллельные 
лучи от осветителя в сходящиеся. Одной из деталей конденсора является 
апертурная диафрагма, которая имеет важное значение для правильного 
освещения препарата. Осветитель состоит из низковольтной лампы 
накаливания с толстой нитью, накал которой можно регулировать, 
коллекторной линзы и полевой диафрагмы (от раскрытия которой зависит 
диаметр освещенного поля на препарате). Зеркало направляет свет от 
осветителя в конденсор. Для того чтобы сохранить параллельность лучей, 
идущих от осветителя в конденсор, необходимо использовать только плоскую 
сторону зеркала. Качество изображения в значительной мере зависит также от 
правильного освещения. 
Настройка освещения и фокусировка микроскопа. Существует несколько 
различных способов освещения препарата при микроскопии. Наиболее 
распространенным является способ установки света по Кёлеру, который 
заключается в следующем: 
1) устанавливают осветитель против зеркала микроскопа; 

2) включают лампу осветителя и направляют свет на плоское (!) зеркало 
микроскопа; 
3) помещают препарат на предметный столик микроскопа; 
4) закрывают зеркало микроскопа листком белой бумаги и фокусируют на 
нем изображение нити лампы; 
5) убирают лист бумаги с зеркала; 
6) закрывают апертурную диафрагму конденсора. Перемещая зеркало и 
слегка передвигая патрон лампы, фокусируют изображение нити на 
апертурной диафрагме. 
Внимание! Расстояние осветителя от микроскопа должно быть таким, чтобы 
изображение нити лампы было равно диаметру апертурной диафрагмы 
конденсора. 
7) открывают апертурную диафрагму конденсора, прикрывают полевую 
диафрагму осветителя и значительно уменьшают накал лампы; 
8) при малом увеличении (10×), глядя в окуляр, получают резкое 
изображение препарата; 
9) слегка поворачивая зеркало, переводят изображение полевой диафрагмы, 
которое имеет вид светлого пятна, в центр поля зрения. Опуская и поднимая 
конденсор, добиваются получения резкого изображения краев полевой 
диафрагмы (вокруг них может быть видна цветная каемка); 
10) раскрывают полевую диафрагму осветителя до краев поля зрения, 
увеличивают накал нити лампы и слегка (на 
1
/
3
) уменьшают раскрытие 
апертурной диафрагмы конденсора; 
11) при смене объектива необходимо проверить настройку света. 
Внимание! После окончания настройки света по Кёлеру ни в коем случае 
нельзя изменять положение конденсора, раскрытие полевой и апертурной 
диафрагмы. 
Освещенность препарата можно регулировать только нейтральными 
светофильтрами или изменением накала лампы с помощью реостата. 
Для правильного освещения препарата при работе с объективами малого 
увеличения (до 10×) необходимо отвинтить и снять верхнюю линзу 
конденсора. 
Внимание! При работе с объективами, дающими большое увеличение - с 
сильными сухими (40×) и иммерсионными (90×) системами, чтобы не 

повредить фронтальную линзу, при фокусировке пользуются следующим 
приемом: наблюдая сбоку, опускают объектив макровинтом почти до 
соприкосновения с препаратом, затем, глядя в окуляр, макровинтом очень 
медленно поднимают объектив до появления изображения и с помощью 
микровинта производят окончательную фокусировку микроскопа. 

жүктеу/скачать 14,39 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: