О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология

 
Таблица 22. Схема основного опыта РСК 
1
(
В опыте сыворотку можно изучать в последовательных двукратных разведениях.
) 
Фаза I. В пробирки наливают требуемое количество изотонического 
раствора натрия хлорида, затем - требуемый объем разведенной сыворотки и в 
таком же объеме рабочие дозы антигена и комплемента. Опыт обязательно 
сопровождают контролем всех участвующих в нем ингредиентов: сыворотки, 
антигена, гемолитической системы и комплемента. 
Пробирки тщательно встряхивают и инкубируют при 37° С 45 мин - 1 ч или 
при 4° С ("РСК на холоде") 18 ч. За это время при наличии специфического 

комплекса происходит связывание комплемента. Проведение реакции "на 
холоде" значительно повышает ее чувствительность и специфичность. 
Фаза II. По окончании инкубации во все пробирки добавляют по 1 мл 
гемолитической системы, которую предварительно выдерживают в термостате 
30 мин (сенсибилизируют). Пробирки встряхивают и снова ставят в термостат. 
Учет результатов. Пробирки оставляют в термостате до полного гемолиза в 
2, 3, 6 и 7-й пробирках (контроль сыворотки, антигена и комплемента на одну 
и две дозы). Раньше всего гемолиз наступит в 7-й пробирке, в которой 
находится двойное количество комплемента. После того как в этой пробирке 
произойдет гемолиз и содержимое ее станет совершенно прозрачным, нужно 
особенно внимательно следить за остальными контролями. Как только 
жидкость в 2, 3 и 6-й пробирках станет прозрачной, следует немедленно 
вынуть штатив с пробирками из термостата. О том, что опыт не задержали в 
термостате дольше, чем нужно, говорит наличие легкой мути (неполного 
гемолиза) в 5-й пробирке - в ней находится только половина рабочей дозы 
комплемента и полного гемолиза при правильной постановке опыта быть не 
может. 
Гемолиз в контроле сыворотки и антигена (пробирки 2 и 3) указывает на то, 
что дозы их были выбраны правильно и что сами по себе ни сыворотка, ни 
антиген комплемент не связывают. 
В контроле гемолитической системы (пробирка 4) при ее правильной работе 
не должно быть даже следов гемолиза - в ней отсутствует комплемент. 
Убедившись в том, что контроли прошли правильно, можно учитывать 
опыт. Отсутствие гемолиза в пробирках опыта расценивают как 
положительный результат реакции. Он свидетельствует о том, что в сыворотке 
есть антитела, специфичные в отношении взятого антигена. Образованный 
ими комплекс связал комплемент и воспрепятствовал его участию в реакции 
гемолиза. Если в опытных пробирках наступит гемолиз, результат реакции 
оценивают как отрицательный. В данном случае нет соответствия между 
антигеном и антителом, комплемент не связан и участвует в реакции гемолиза. 
Параллельно с сывороткой больного ставят такой же опыт с заведомо 
положительной сывороткой (т. е. с сывороткой, в которой есть антитела к 
данному антигену) и заведомо отрицательной, в которой нет специфических 
антител. При правильной постановке опыта в первом случае должна быть 
задержка гемолиза, а во втором случае будет гемолиз. 
Интенсивность реакции выражают следующим образом: 
++++ полная задержка гемолиза. Эритроциты образуют равномерную муть 
или оседают на дно. В этом случае жидкость в пробирке становится 
бесцветной; 

+++ лизировано примерно 25% эритроцитов. Осадок меньше, жидкость над 
ним слегка розовая. Результат РСК также оценивают как резко 
положительный; 
++ лизировано примерно 50% эритроцитов. Осадок небольшой, жидкость 
розовая. Положительный результат РСК; 
+ лизировано примерно 75% эритроцитов. Незначительный осадок, над ним 
интенсивно окрашенная жидкость. Сомнительный результат РСК; 
- 
лизированы все эритроциты. Жидкость интенсивно окрашена и 
совершенно прозрачна. Отрицательный результат РСК. 

жүктеу/скачать 14,39 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: