О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология


Метод серийных разведений на плотной питательной среде



Pdf көрінісі
бет75/305
Дата20.12.2022
өлшемі14,39 Mb.
#58441
түріУчебник
1   ...   71   72   73   74   75   76   77   78   ...   305
Байланысты:
8dccb36

Метод серийных разведений на плотной питательной среде. Готовят 
двукратные разведения антибиотика, как и при методе серийных разведений в 
жидкой питательной среде. Затем берут 1 часть каждого разведения 
антибиотика и 9 частей питательного агара, расплавленного и охлажденного 
до 42° С (из расчета 1 мл антибиотика + 9 мл МПА), хорошо перемешивают и 
наливают в чашки Петри. 
Густоту (концентрацию) культуры определяют по оптическому стандарту 
мутности № 10 и разводят стерильным изотоническим раствором до 
10
7
микробных тел в 1 мл. Бактериальной петлей наносят испытуемые 
культуры на поверхность питательного агара с антибиотиком. На одну чашку 
делают посев 20-25 штаммов. Засеянные чашки ставят в термостат при 37° С 
на 16-20 ч для большинства видов микроорганизмов. Чашка с питательным 
агаром без антибиотика, на которую наносят испытуемые культуры, является 
контрольной. 
Учет результатов проводят при наличии роста в контрольной чашке, а 
минимальную ингибирующую концентрацию антибиотика определяют по 
последней чашке Петри, где отмечают полную задержку роста бактерий. 
Метод дорожки по Флемингу. Метод применяют для определения спектра 
действия антибиотика. В чашке Петри с МПА стерильным скальпелем 
вырезают дорожку шириной 1 см и удаляют ее. Затем в пробирку с 
растопленным и охлажденным до 42-45° С мясопептонным агаром вносят 
определенную концентрацию раствора антибиотика. Содержимое пробирки 
перемешивают и выливают в дорожку так, чтобы жидкость не выходила за ее 
пределы. После застывания агара перпендикулярно к дорожке засевают петлей 
культуры нескольких исследуемых микроорганизмов. Посевы помещают в 
термостат на 18-24 ч. 


Учет результатов. Чувствительные к препарату культуры начинают расти 
лишь на некотором расстоянии от дорожки, нечувствительные растут до 
самого края. 
Методика работы с оптическим стандартом мутности 
Для определения количества микробных тел в 1 мл используют оптические 
стандарты мутности. Их изготовляет Государственный НИИ стандартизации и 
контроля медицинских биологических препаратов МЗ СССР им. Л. А. 
Тарасевича (ГИСК). Существуют следующие стандарты мутности: 
0,5 млрд. микробов в 1 мл - № 5 (5 ед. мутности)
0,9 " " " 1 " - 
№ 9 (9 " " )
1 " " " 1 " - 
№ 10 (10 " " )
1,1 " " " 1 " - 
№ 11 (11 " " ) 
Перед определением количества микробных тел в 1 мл сначала получают 
микробную взвесь. Для этого в пробирку с выросшей на скошенном агаре 
культурой наливают 5-6 мл изотонического раствора натрия хлорида и, вращая 
пробирку между ладонями, смывают культуру с поверхности среды. Часть 
полученной взвеси переносят стерильной пипеткой в стерильную пробирку, 
толщина стенки и диаметр которой соответствует пробирке оптического 
стандарта. Затем сравнивают густоту полученной микробной взвеси с одним 
из оптических стандартов мутности. В случае необходимости микробную 
взвесь разводят, прибавляя изотонический раствор натрия хлорида до нужной 
мутности. Если мутность полученной микробной взвеси совпадает с 
мутностью оптического стандарта, то количество микробных тел в ней 
соответствует номеру стандарта. 
Контрольные вопросы 
1. Что является критерием чувствительности микроорганизмов к 
антибиотикам при лабораторном исследовании? 
2
. Когда следует выделять культуры микроорганизмов из организма 
больных для определения чувствительности к антибиотикам? 
3. Какие существуют методы определения чувствительности 
микроорганизмов к антибиотикам? 
Задание 
1. Возьмите у преподавателя флакон с пенициллином, содержащий в 1 мл 
300000 ЕД, и приготовьте основной раствор антибиотика в 32 ЕД/мл. 
2. Определите чувствительность микроорганизмов к антибиотикам методом 
бумажных дисков, учтите результаты и дайте ответ. 


3. Определите чувствительность выделенной культуры стафилококков к 
пенициллину методом серийных разведений в жидкой питательной среде, 
учтите результаты и дайте ответ. 
Химиопрофилактика и химиотерапия 
В медицинской практике для предупреждения и лечения инфекционных 
болезней давно применяли химические вещества. Индейцы для борьбы с 
малярией употребляли кору хинного дерева, а в Европе уже в XVI веке 
применяли ртуть для лечения сифилиса. Химиотерапия - это применение для 
лечения заболевания химических веществ, обладающих специфическим 
действием на клетки возбудителя заболевания и не повреждающих клетки и 
ткани человека. Основы научной химиотерапии были сформулированы П. 
Эрлихом. Он получил первые химиотерапевтические препараты - сальварсан 
и неосальварсан, содержащие мышьяк. В течение нескольких десятилетий их 
использовали при лечении сифилиса. 
Химиопрофилактика - применение химических препаратов для 
предупреждения инфекционных заболеваний. 
В основе действия химиотерапевтических препаратов на клетки 
возбудителей заболеваний лежит сходство их молекул с рядом веществ, 
необходимых для метаболизма микроорганизмов: аминокислот, витаминов, 
ферментов и т. д. Препарат всасывается бактериальной клеткой вместо 
необходимого ей компонента и начинает свое разрушительное действие. В 
результате нарушения важнейших систем клетки она погибает (бактерицидное 
действие), а если нарушения слабые, то отмечается бактериостатическое 
действие. 
Важным этапом в развитии химиотерапии явилось создание 
сульфаниламидных препаратов (стрептоцид, норсульфазол, сульфадимезин и 
др.). Они дают хороший лечебный эффект при ангине, гнойно-воспалительных 
инфекциях, кишечных заболеваниях. В борьбе с туберкулезом помогли 
синтетические 
химиотерапевтические 
препараты 
ПАСК 
(парааминосалициловая кислота), тибон, фтивазид и др. В настоящее время 
разрабатывают 
и 
применяют 
химические 
противовирусные 
и 
противоопухолевые препараты. Большое значение имеют антибиотики - 
химиотерапевтические препараты биологического происхождения. 
Однако химиотерапевтические препараты обладают рядом отрицательных 
свойств. Воздействуя на определенную цепь обмена веществ, они могут 
наряду с клеткой возбудителя поражать и клетки человека. В результате 
лечения химиопрепаратами в организме человека накапливается большое 
количество промежуточных продуктов, обладающих побочным действием. 
Описаны случаи изменения состава крови, мутации клеток и другие 
функциональные нарушения организма человека в результате применения 
химиотерапевтических препаратов. 



Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   71   72   73   74   75   76   77   78   ...   305




©emirsaba.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет