О книге Special for Dabl-v aka Эукариот Фрида Карловна Черкес, Лина Борисовна Богоявленская, Наталья Александровна Бельская – Микробиология

получают из изолированных колоний - обособленных скоплений микробов на 
плотной среде. Считают, что чаще всего колония развивается из одной 
микробной клетки, т. е. является чистой культурой этого микроорганизма. 
Этапы выделения чистой культуры: 
1-
й день - получение изолированных колоний. Каплю исследуемого 
материала петлей, пипеткой или стеклянной палочной наносят на поверхность 
агара в чашке Петри. Шпателем втирают материал в поверхность среды; не 
прожигая и не перевертывая шпателя, производят посев на 2-й, а затем на 3-й 
чашке. При таком посеве на 1-ю чашку приходится много материала и 
соответственно много микробов, на 2-ю меньше и на 3-ю еще меньше. 
Можно получить изолированные колонии при посеве петлей. Для этого 
исследуемый материал эмульгируют в бульоне или изотоническом растворе 
натрия хлорида. 
2-
й день - изучают рост микробов на чашках. В 1-й чашке обычно бывает 
сплошной рост - выделить изолированную колонию не удается. На 
поверхности агара во 2-й и 3-й чашке вырастают изолированные колонии. Их 
изучают невооруженным глазом, с помощью лупы, при малом увеличении 
микроскопа и иногда в стереоскопическом микроскопе (см. главу 31). Нужную 
колонию отмечают со стороны дна чашки и пересевают на скошенный агар. 
Посевы ставят в термостат. 
Внимание! Пересевать можно только изолированные колонии. 
3-
й день - изучают характер роста на скошенном агаре. Делают мазок, 
окрашивают его и, убедившись в том, что культура чистая, приступают к ее 
изучению. На этом выделение чистой культуры заканчивается. Выделенная из 
определенного источника и изученная культура, называется штаммом. 
При выделении чистой культуры из крови (гемокультуры) ее 
предварительно "подращивают" в жидкой среде: 10-15 мл стерильно взятой 
крови засевают в 100-150 мл жидкой среды. Так поступают потому, что в крови 
обычно мало микробов. Соотношение засеваемой крови и питательной среды 
1:10 не случайно - так достигается разведение крови (неразведенная кровь 
губительно действует на микроорганизмы). Колбы с посевом ставят в 
термостат. Через сутки (иногда через большее время в зависимости от 
выделяемой культуры) из содержимого колб делают высевы на чашки для 
получения изолированных колоний. При необходимости повторяют высевы с 
интервалами 2-3 дня. 
При выделении чистой культуры из мочи, промывных вод желудка и других 
жидкостей их предварительно центрифугируют в асептических условиях и 
засевают осадок. Дальнейшее выделение чистой культуры производят 
обычным способом. 

Для выделения чистой культуры широко применяют элективные среды. 
В ряде методов для получения чистых культур используют биологические 
особенности выделяемого микроба. Например, при выделении 
спорообразующих бактерий посевы прогревают при 80° С 10 мин, убивая этим 
вегетативные формы; при выделении возбудителя туберкулеза, устойчивого к 
кислотам и щелочам, с помощью этих веществ посевной материал 
освобождают от сопутствующей флоры; для выделения пневмококка и 
палочки чумы исследуемый материал вводят белым мышам - в их организме, 
высокочувствительном к данным возбудителям, эти микробы размножаются 
быстрее других. 
В научно-исследовательской работе, особенно при генетических 
исследованиях, необходимо получать культуры заведомо из одной клетки. 
Такая культура называется клон. Для ее получения чаще всего пользуются 
микроманипулятором - прибором, снабженным инструментами (иглами, 
пипетками) микроскопических размеров. С помощью держателя под 
контролем микроскопа их вводят в препарат "висячая капля", извлекают 
нужную клетку (одну) и переносят ее в питательную среду. 
Изучение выделенных культур 
Изучение морфологии, подвижности, тинкториальных свойств (см. главу 3), 
характера роста на средах (культуральные свойства), ферментативной 
активности и ряда других особенностей выделенного микроба позволяет 
установить его таксономическое положение, т. е. классифицировать 
микроорганизм: определить его род, вид, тип, подтип, разновидность. Это 
называется идентификацией. Идентификация микроорганизмов очень важна 
при диагностике инфекций, установлении источников и путей ее передачи и в 
ряде других научно-практических исследований. 
Культуральные свойства 
Разные виды микроорганизмов по-разному растут на средах. Эти различия 
служат для их дифференциации. Одни хорошо растут на простых средах, 
другие - требовательны и растут только на специальных. Микроорганизмы 
могут давать обильный (пышный) рост, умеренный или скудный. Культуры 
могут быть бесцветными, сероватыми, серо-голубыми. Культуры 
микроорганизмов, образующих пигмент, имеют разнообразную окраску: 
белую, желтую или золотистую у стафилококка, красную - у чудесной 
палочки, сине-зеленую - у сине-зеленой палочки, пигмент которой, 
растворимый в воде, окрашивает не только колонии, но и среду. 

жүктеу/скачать 14,39 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: