Орындаған: Төлегенова Б. Д тобы: в-жмқБ-05-21 Қабылдаған: Полатбекова Ш. Т жоспар
жүктеу/скачать 307,5 Kb.
|
1 2
Байланысты:Төлегенова Б.Д микробиология 12 срс
| 2. Материалдар мен әдістер
2.1. Этикалық мәлімдеме Бұл зерттеудегі жануарларға эксперименттер Тайваньдағы Ұлттық денсаулықты зерттеу институттарының (NHRI) зертханалық жануарлар орталығының нұсқауларына сәйкес жүргізілді. Жануарларды зерттеу хаттамалары NHRI жануарларды күту және пайдалану жөніндегі институционалдық комитетімен қаралды және бекітілді (бекітілген хаттама № NHRI-IACUC-107,095-A). Жануарлардағы CVA10 иммуногенділігін зерттеу CVA10 бөлшектерінің тазартылған формалинмен инактивтендірілген (көлем/көлем 1:4000 сұйылту) үлгілері алюминий фосфатымен (Alum, InvivoGen) адсорбцияланды. 6 әйел BALB/c тышқандар тобы (6–8 апталық) бұлшықет ішіне 0,2 мл антигенмен (0,5 мкг вирустық ақуыз + 60 мкг Alum) иммунизацияланды. Тышқандар праймерден кейін екі апталық аралықпен бірдей дозамен екі рет күшейтілді. Иммунизацияланған тышқандардың қаны соңғы күшейтуден кейін бір аптадан кейін жиналды және сарысу вирусты бейтараптандыруды зерттеу үшін пайдаланылды. Вирусты бейтараптандыру сынағы Вирусты бейтараптандыру сынағы (Nt) бұрын сипатталғандай орындалды (Liu және т.б., 2011). Иммунизацияланған тышқандардан алынған сарысу үлгілері 56 °C температурада 30 минут бойы белсендірілмеген. Әр сарысу үлгісі содан кейін қоректік ортамен сериялық сұйылтылған (2 есе). 200 мкл сұйылтылған сарысуы бар түтіктерге титрі 200 TCID50-ге тең екі жүз мкл вирус ерітіндісі қосылды. 4 °C температурада 18–24 сағат бойы инкубациялаудан кейін бұл үлгілер (100 мкл/ұңғыма) RD жасушалары бар 96 шұңқырлы пластиналарға қосылды. Дақылдар 6 күн бойы 37 °C температурада инкубацияланды және TCID50 жұқтырылған RD жасушаларында CPE мөлшерін анықтағаннан кейін өлшенді. Nt мәні – қан сарысуының сұйылтуының геометриялық реципрокты, ол вирус титрінің 50%-ға төмендеуін береді, Рид-Мюенх әдістерін қолдану арқылы алынған. Нәтижелер: Таңдалған ұяшықтарынан CVA10 таратылады CVA10 өндірісін арттыру үшін RD, Vero, MDC HEK293A және бірнеше рет CVA10 репликациясына сынақтан өтті. MOI = 10−4 кезінде CVA10 инфекциясынан кейін RD және HEK29 A жасушаларында CPE байланысы мүмкін және бұл жасушалардың лизиске ұшырады. Керісінше, Vero және MDCK жасушалары айқын CPE көрсетеді және бұл кескіннің кескіні 6 DPI-ден кейін колба кескіні бекітілген (1А-сурет). Вирус репликациясының кинетикасы C10 титрлері RDVA қауіпсіз культурасында 3 DPI кезінде 1 × 1010 TCID50/мл жеткенін көрсетті (1В-сурет). CVA10 вирус титрі HEK293A жасушаларында 6 DPI кезінде 1 × 109 TCID50/мл жетті, ал вирус титрлері Vero және MDCK арқылы анықталмайтын дерлік болды. RD өнімінің өнімі және кәдімгі вакцина өндірісі үшін қолайлы хост емес оны ескеру, біздің өнім HEK293A өнім CVA10 көбеюі үшін қанағаттанарлық хост бола ал және келесі өнімде CVA10 культура өндірісі үшін пайдаланылады Қорытынды Қорытындылай келе, біз HEK293A жасушасы CVA10 және басқа HFMD байланысты энтеровирустарды өндіру үшін қолайлы жасуша желісі екенін көрсеттік. Сарысусыз HEK293A жасушалық суспензия мәдениеті - спиннер мәдениеті мен биореактор культурасы жүйесін пайдалана отырып, CVA10 өндірісін кеңейтудің оңай жолы. Сарысусыз HEK293A жасуша жүйесі CVA10 өнімділігін айтарлықтай жақсарта алады және Веро жасушаларынан алынған биохимиялық және иммуногендік қасиеттерді сақтайды. CVA6 және EV-A71 сарысусыз HEK293A жүйесі арқылы да таралуы мүмкін. Сарысусыз HEK293A жасуша культурасы көп валентті HFMD вакциналарын өндіру үшін маңызды шешім бере алады деп күтеміз. жүктеу/скачать 307,5 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|
1 2