Өсімдік ұлпаларын өсіру және биотехнология бойынша зертханалық

Петри тостағаншалары. 
Жұмыстың орындалутәртібі: 
1. Төменгі температурамен өңделген масақтарды 3 минут 70%-тік
этил спиртінің ерітіндісінде ұстайды. 
2. Масақтарды 3 рет дистильденген сумен жуады. 
3. Масақтың ортаңғы бөлігінен ( масақтың төменгі және жоғарғы
жағындағы 3-5 масақшаларды алмайды) пинцет көмегімен
масақшаларды үзіп алады. 
4. Бинокулярлы микроскоптың астында масақшалардың кауызын 
ашады да ине көмегімен әр масақшадан 3 тозандық бөліп алады. 
5. Тозандықтарды стерильді ине көмегімен 1 мг/л 2,4-Д + 0,5 мг/л 
кинетин немесе 5 мг/л ИСҚ + 1 мг/л БАП фитогормондарымен 
толықтырылған агарлы N 6 қоректік ортасы бар пробиркаларға (әр 
пробиркаға 15-20 данадан) немссс Пстри тостағаншаларына (әр 
тостағаншаға 60-80 данадан) отырғызады. 
6. Материалды, андрогенді құрылымдар пайда болғанша, 
қараңғыда, 25-27 С-лық температурада, термостатта өсіреді. 
7. Қоректік ортаға отырғызылғаннан 3-4 апта өткен соң андрогенді 
құрылымдарды (глобулалар, эмбриоидтар) көлемдері 1-2 мм болған 
кезде оларды фитогормонсыз ортаға отырғызады да, өсімдік 
регенеранты түзілгенге дейін фотопериоды 16 сағаттык және жарық 
қарқындылығы 5000 лк режимде өсіреді. 
8. Андрогенді құрылымдардың түзілген уақыты мен 
қарқындылығы туралы қорытындылар жасайды. 
№ 4 ж ұ м ы с.
Бидай мен арпаның оқшауланған микроспораларын 
өсіру 
Кажетті материалдар мен аспаптар: 
Төменгі температуралық өңдеуден өткен бидай мен арпа 
масақтары, тозандықтары. 
Мурасиге және Скуг қоректік ортасы; 7%-тік кальций 
гипохлориті ерітіндісі; 2,4-Д; НСҚ; кинетин; БАП. 
Биокулярлы лупа; инелер; пробиркалар; диаметрі 40-60 мм-лік 
Петри тостағаншалары. 

Жұмыстың орындалутәртібі: 
 
1. Масақтарды 7%-тік кальций гипохлориті срітіндісінде 8-10 минут 
стерильдеп, 3 қайтара стерильді дистильденген сумен шаяды. 
2. Масақтан масақтарды үзіп алып, бинокулярлы лупаның астында әр 
масақтан 3 тозандықтан алады. 
3. Стерильді ине көмегімен тозаңдықтарды 0,1 мг/л БАП, 0,5 мг/л НСҚ 
и 0,1 мг/л фитогормондарымен толықтырылған 1 мл Мурасиге және 
Скуг қоректік ортасы құйылған Петри тостағаншасына салады (15-20 
дана). 
4. Жаңадан оқшауланған тозаңдықтарды өткір скальпель немесе 
ұстара көмегімен көлденеңінен немесе ұзынынан екіге бөледі де, 
микроспоралардың сұйық ортаға бөлініп шығуы үшін, 3-4
сағат бойы шайқағыш аппаратында шайқайды.
5. Микроспоралары бар Петри тостағаншаларының шетін 
парафильммен желімдеп, каллус пайда болғанға дейін, қараңғыда, 25-
27 С температурада инкубациялайды. 
6. Микроспораларды отырғызғаннан 2-3 аптадан кейін, түзілген 2- 3 
мм-лік каллустарды агарлы, құрамы жоғарыдағыдай, бірақ 1 мг/л ИСҚ 
және 0,25 мг/л 2,4-Д-мен толықтырылған қоректік ортаға ауыстырып, 
жарық 
қарқындылығы 
5000 
лк 
болатын 
және
16 сағаттық фотопериодтық режимде өсіреді. 
7. Бір аптадан кейін, өсімдікті регенерациялау үшін, каллустарды 0,05 
мг/л кинетин және 1 мг/л НСҚ-мен байытылған Мурасиге және Скуг 
коректік ортасына ауыстырады. 
8. Каллустардың пайда болған уақыты мен қаркындылығы туралы 
қорытындылар жасайды. 

жүктеу/скачать 4,52 Mb.

Достарыңызбен бөлісу: