Медициналык, микробиология
Жукпалы ауруларга диагноз коюдыц генетикальщ aflicTepi
жүктеу/скачать 47,48 Mb. Pdf көрінісі
|
Медициналық микробиология
- Бұл бет үшін навигация:
- 4.3. Ж уцпалы ауруларга диагноз коюда гендш эдютерд1 колдану
| 4.2. Жукпалы ауруларга диагноз коюдыц генетикальщ aflicTepi
Рестрикционды талдау. Бул эд!с рестриктаза деп аталатын ферментт!ц колданылуына байланысты нег!зделген. Рестриктазалар - эндонуклеазалар, олар ДНК молекуласыныц фосфатты байланыстарын бос жерлерде емес, белг!л! 6 ip нуклеотидтерд!ц TipKecTiicrepiH де узе отырып ыдыратады. Молекулальщ генети- каныц эдютер! уш!н непзг! орынды рестриктаза алады, олар ортальщ симметриялы жэне симметрияныц ортальщ ociHeH eKi жакка б!рдей окитын каб!лет! бар т!ркест!ктерд! таниды. ДНК - ныц узш ген нуктеш симм етрияны ц ос!мен сэйкес келу! м ум ю н, немесе оган сэйкес жылжытылуы мумюн. 84 о ц у л ы ц Каз1рп кезде эр турл1 бактериялардан 175 - ке ж уык б1рнеше рестриктазалар болш ген ж эне тазартылган. Егер б е л г Ы м и кробтан бо л ш ген ДНК - ны б е л г Ы б 1 р р естр и ктазам ен ец д есе, ол ДНК фрагменттершщ белпленген катац айкын мелшершщ тузш уш е экелед 1 . Эр типтщ фрагменттерш щ мелшерш электрофорез бойынша агарлы гельде аныктауга болады: усак фрагментгер ¡ршерге Караганда гелде жылдам байкалады, сонымен б1рге олардын, есу узакдыгы да узынырак келед1. Гельд1 бромды этидимен бояп УК - сэулемен суретке туЫредь Осындай тэсшмен микробтын б1р турш щ рестрикциялык картасын алуга болады. Эртурл1 штаммдардан бел1нген ДНК рестрикциясыньщкарталарын салыстыру аркылы гентикалык туыстастыкты ажыратуга, мутацияга ушыраган аймактарды табуга болады. Бул тэсш сонымен б1рге нуклеотидт1 жуптын т1ркест1гш аныктайтын эдютщ бастамасы рет1нде жэне молекулальщ гибридизация эдюшде колданылады. 4.3. Ж уцпалы ауруларга диагноз коюда гендш эдютерд1 колдану Полимераздъщ т1збектт реакция (ПТР). ПТР зерттеу затынан (су, азык-тул1к, наукастан алынган зерттеу заты, т.б.) таза дакыл б о л т алмай, ондагы микроб ДНК-лын табу аркылы микробты аныктауга мумкш дж беред 1 . Бул реакцияны ж урпзу уш1н зерттеу затынан берглген микроб генше спецификалы болып келет1н ДНК-лын белш алады. Гещц табу оны жинактау аркылы юке асырылады. Ол уннн бастапкы геннщ ДНК- ныц 3- ушына комплементарлы праймерлер болуы кажет. Геннщ жинакталуы (амплификациясы) келеЫ жолмен ж урпзш едь Зерттеу затынан белш ш алынган ДНК - н жылытады. Жылыту барысында ДНК 2 ж1пшеге ажырайды. Праймерлерд1 косады. ДНК мен праймерлер коспасын суытады. Осы кезде ¡здеп отырган ген ДНК -л ы коспада бар болса праймерлер оныц комплементарлы бел 1 мдер 1 мен байланысады. Содан сон ДНК мен праймер коспасына ДНК-полимераза мен нуклеотидтерд1 косады. ДНК-полимеразаныц юке косылуына оптимальды температура кажет. Мше осындай жагдайларда ДНК гешмен праймерлер комплементарлы болса, нуклеотидтер праймердщ 3-ушына косылып, нэтижесшде генн 1 ц 2 кеппрмес 1 синтезделедг Будан кей1н цикл кайталанады, осы кезде геннщ ДНК-ныц саны эр жолы ею есеге к е б е й т отырады (12 - сурет). Реакция арнайы курал - амплификаторларда журпзгпедк ПТР-ны вирустык жэне бактериальдык инфекцияларды диагноз коюда колданады. |