54
мл болатын микроцентрифуга тҥтіктерінде 90-120 минут бойы
жҥргізіледі. Центрифугаланған ҥлгі тҧнбасын лизиске ҧшыратушы
ерітіндімен ӛңдеп, депротеинизациялағаннан кейін сорбент кӛмегімен
тазартады.
Полимеразалық тізбекті реакцияны қою
ҥшін қолданылатын
комплект
қҧрамына
ПТР-буфер,
дезоксинуклеозидҥшфосфаттар
қоспасы, телімді қос олигонуклеотидті праймерлер,
Tag-
полимераза,
минералды май кіреді. Зерттеуге алынған ҥлгінің белгілі бір мӛлшерін
арнайы «Eppendorf» тҥтікшелеріне енгізгеннен кейін ҥстінен
амплификациялаушы қоспаларды,
Tag-
полимераза ферментін және бір
тамшы минералды майды қосады да, автоматтандырылған термостатта
амплификация процесі 2-3 сағат аралығында жҥргізіледі. Зерттеуге
алынған ҥлгілермен бірге бақылау ҥлгілері де қатар қойылады.
Нәтижелерді тіркеуге
арналған комплект қҧрамына электрофорез
буферлерінің қоспалары мен агароза гелі жатады. Жҧмыстың бҧл кезеңі
амплификацияланған телімді ДНҚ фрагменттерін қҧрамында этидий
бромиді бар 1%-ды агароза геліндегі электрофорез кӛмегімен іске
асырылады.
Электрофореграмма
нәтижесі
ультракҥлгін
сәуле
шығаратын трансиллюминаторда оң нәтиже кӛрсеткен амплификация
ӛнімдері (ДНҚ) мен бақылауға алынған ДНҚ препаратында қызғылт-
сары тҥсті болып жарқырап кӛрінеді.
Достарыңызбен бөлісу: