Применение дополнительных гистологических методов окраски в доклинических исследованиях
жүктеу/скачать 2,87 Mb.
|
Гиистоло
| Окраска жиров. Обнаружение липидов в клетках и тканях осуществляется группой "жировых красителей", имеющих общее название «Суданы» (Судан черный, Судан III, Судан IV и другие), а так же нильблаусульфат и осмиевую кислоту. Эти вещества, являясь жирорастворимыми, легко проникают в липидсодержащие структуры, а не взаимодействует с гидротированными белками (рисунок 15,14). Таким образом, процесс окрашивания липидов представляет собой не гидрофобное взаимодействие, а имеет чисто физический характер, что не позволяет проводить избирательное окрашивание отдельных липидов разного химического состава. Для этой цели перед проведением гистохимической реакции необходимо использовать методы экстракции отдельных групп липидов разными системами растворителей [7,19,].
Наиболее часто применяют судан III и шарлах красный. Они выявляют все жиры, липоиды и нейтральные жиры, интенсивно окрашивая их в оранжево-красный цвет. Но есть существенные особенности при обработке материала. Прежде всего, формалиновая фиксация не должна быть более 48 часов. После чего на замораживающем микротоме сразу изготавливают срезы, поскольку при обычной проводке эфир, ксилол и крепкие спирты растворяют и извлекают жиры из клеток в растворы, именно поэтому после окраски срезы нельзя обезвоживать и заключать обычным способом. Препараты заключают в глицерин или глицерин-желатин, которые не растворяют жиры и хорошо просветляют не обезвоженный препарат, но при длительном хранении препаратов наблюдается выпадение Судана в осадок в виде красных кристаллов. Лучше использовать специальные монтирующие среды на водной основе [13,20]. Несмотря на используемый метод заключения, краситель все равно быстро выцветает, поэтому желательно исследовать препараты вскоре после их изготовления [10, 20]. Рисунок 13 – Срез мышцы. Окраска Судан Рисунок 14 – Схема окрашивания липидов III [13]. Жировые включения окрашены Суданом желтым. Стоит отметить метод окраски макропрепаратов при помощи Sudan Red 5B или масляный красный (Oil Red O), которые применяются для визуализации атеросклеротического повреждения сосудов. Oil Red O - это лизохромный диазокраситель, используемый для окрашивания нейтральных триглицеридов и липидов. Он окрашивает липиды в красный цвет с максимальным поглощением при 500-600 нм. На интиме аорты, после обработки красителем, можно обнаружить даже ранние стадии патологического процесса, поскольку жировые включения окрашиваются красным и хорошо визуализируются глазом [20] (рисунок 15). Рисунок 15 – Аорта кролика. Окраска Oil Red. Атеросклеротические бляшки окрашены красным. жүктеу/скачать 2,87 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|