Применение дополнительных гистологических методов окраски в доклинических исследованиях
жүктеу/скачать 2,87 Mb.
|
- Бұл бет үшін навигация:
- Специальные методы. Выявление повреждений миокарда по Ли
| Окраска на амилоид. Для выявления скопления амилоида (патологический белково-полисахаридный комплекс, образующийся при хронических заболеваниях) в тканях. Наиболее простым и широко используемым красителем для этих целей является конго красный (рисунок 16). Данный краситель окрашивает белок в красный цвет. Кроме того возможно изучение препаратов в поляризационном свете, при этом массы амилоида дают желто-зеленое свечение, однако рекомендуется заключение срезов в гуммиарабик для исключения свечения коллагеновых волокон [2, 21]. Прочное связывание амилоида с красителем не до конца изучено и происходит по нескольким механизмам: за счет водородных связей гидроксильных групп, с помощью положительно заряженных амминокислот и посредством полярных контактов [22] (рисунок 17).
Рисунок 16– Срез печени. Окраска конго Рисунок 17 – Схема окрашивания амилоида красным. Включения амилоида кирпично- Конго Красным: 1)водородные связи, 2) красные. электростатические, 3) полярные связи Специальные методы. Выявление повреждений миокарда по Ли (ГОФП-метод: гематоксилин — основной фуксин — пикриновая кислота). Данный метод был описан Liе и соавторами в 1971 году под названием «фуксиноррагический метод». Основной фуксин, являясь катионным красителем, взаимодействует с продуктами распада, высвобождаемых из саркоплазмы кардиомиоцитов (в частности с гликогеном), тем самым окрашивая их в красно — коричневый цвет. При этом интактные ткани остаются желто-коричневого или бледно-зеленого цветов, поскольку, как описывалось выше, хорошо воспринимают пикриновую кислоту (рисунок 18,19), тем самых создавая хороший контраст с поврежденными участками. Эффективность ГОФП-метода доказана для объективного выявления ишемизированных участков миокарда, причем при повреждении как коронарогенного, так и некоронарогенного генеза. Кроме того опосредованно можно визуализировать соединительную ткань (например, рубцовая ткань после перенесенного инфаркта миокарда окрашивается в сиреневые оттенки, а эластические волокна становятся красными). Особенно эффективна методика на ранних этапах поражения сердечной мышцы, поскольку в поражённых кардиомиоцитах фуксинофильный субстрат появляется вначале вблизи ядра, затем распространяется по всей цитоплазме, а в дальнейшем и на большую часть мышечного волокна [12, 23]. Но по прошествии времени, когда мышечные волокна начинают разрушаться и рассасываться, фуксинофильный субстрат полностью исчезает, и окраска утрачивает свое значение [24]. Рисунок 18 – Срез миокарда крысы. Рисунок 19 – Схема окрашивания миокарда Окраска ГОФП. Кардиомиоциты в ГОФП: 1) ишемизированные состоянии ишемии красно-коричневые. кардиомиоциты, 2) интактные кардиомиоциты Для макроскопической оценки площади ишемического повреждения тканей, а особенно миокарда и головного мозга, можно использовать соли тетразолия, в частности трифенилтетразолия хлорид (ТТХ) (рисунок 20). Соли тетразолия реагируя с дегидрогеназами (группы ферментов катализирующих окислительно-восстановительные реакции) восстанавливаются до окрашенных соединений – формазанов. Таким образом, в очаге повреждения высвобождается большое количество дегидрогеназ, которые при взаимодействии с тетразолием дают хорошо видимый глазом красный цвет (рисунок 21). Реакция позволяет выявить ишемические повреждения на ранних донекротических стадиях патологического процесса [25,26]. Рисунок 20 – Срезы головного мозга Рисунок 21 – Схема окрашивания крысы. Окраска тетразолия хлоридом. ишемизированных клеток ТТХ Ишемизированные участки не окрашиваются. жүктеу/скачать 2,87 Mb. Достарыңызбен бөлісу:
|