Реферат по дисциплине «Системная биология
ГЛАВА 1 ОСОБЕННОСТИ ПРИЕМОВ ИММОБИЛИЗАЦИИ ЖИВОТНЫХ КЛЕТОК
жүктеу/скачать 40,05 Kb.
|
ГЛАВА 1ОСОБЕННОСТИ ПРИЕМОВ ИММОБИЛИЗАЦИИ ЖИВОТНЫХ КЛЕТОКБольшинство клеток твердых тканей, таких как ткани почек, печени, кожи, являются поверхностно-активными. В зависимости от подходов, используемых для прикрепления изолированных клеток к твердой подложке, или матрице, используют различные методики культивирования клеток тканей животных и человека. Из-за поверхностно-активных свойств in vitro их можно культивировать только в виде тонких пластов или монослоев, непосредственно связанных с поверхностью подложки. Глубинное выращивание клеток в монослое Направлено на получение наибольшей концентрации клеток в наименьшем объеме газовой фазы. При этом клетки животных размножаются, растут и развиваются в прикрепленном состоянии до тех пор, пока не сольются в монослой [3]. Отдельные клетки, образующие этот монослой, контактируют как с соседними, так и с самой подложкой, поэтому их можно рассматривать как иммобилизованные. Однако, в отличие от иммобилизованных растительных клеток и ферментов, связывание между поверхностно-активными клетками млекопитающих и твердой подложкой обычно проводят без специальной физической или химической обработки. Это связывание осуществляется благодаря исходной активности препарата изолированных клеток, совместимости клеток с твердой подложкой, а также наличию в сыворотке или специально добавленных в среду веществ, способствующих связыванию клеток. Для некоторых видов клеток (например, клеток лимфобластоидного происхождения), обладающих особыми свойствами, разработана иная система культивирования. При использовании микроносителей, суспендируемых в питательной среде, площадь выращиваемых клеток увеличивается. Клетки закрепляются на их поверхности, а затем разрастаются в виде монослоя. В таких системах совмещаются монослойные и суспензионные культуры клеток животных [10]. Применяют следующие микроносители: сефадексы с коллагеновым покрытием (высокомолекулярный полимер декстрана); отрицательно заряженный полистирол; полые стеклянные сферы; микроносители из пористого шлачного стекла и др. После выращивания клетки отделяют от микроносителей: центрифугированием; фильтрованием; обработкой трипсином с последующим промыванием и сепарированием [5]. Данный метод применяется для получения вирусных вакцин (против бешенства, полиомиелита, ящура). Жизнеспособные, чувствительные к действию эндогенных веществ (гормона) клетки можно выделить либо из нормальных, либо из патологических тканей человека или же из аналогичных тканей животных. в любом случае изолированные клетки получают, подвергая образцы тканей ферментативному диспергированию. При этом чтобы избежать некроза и получить максимальный выход жизнеспособных клеток, ткань следует измельчать как можно быстрее. Все операции следует проводить в стерильных условиях. Измельчение тканей начинают с приготовления срезов с помощью микротома, успешно можно применять ножницы и пинцет. Ферментативное диспергирование осуществляют с помощью трипсина в колбе, получая в конечном итоге суспензию жизнеспособных клеток. Непосредственно перед иммобилизацией определяется плотность популяции клеток и оценивается их жизнеспособность [1]. Иммобилизация поверхностно-активных клеток на твердой подложке – процесс многоступенчатый, который обычно начинается с адсорбции на отрицательно заряженной поверхности подложки специальных веществ, способствующих прикреплению клеток. К таким веществам относятся гликопротеины, получаемые из сыворотки, либо из клеток, определенных первичных культурах эпителиальных клеток). Кроме того, из эпителиальных клеток выделяют особые факторы связывания, которые осуществляют прикрепление клеток к подложке, связывая гликопротеины клеточной поверхности с предварительно адсорбированными сывороточными или фибробластными гликопротеинами [9]. Таким образом, иммобилизация клеток достигается благодаря первоначальному контакту и последующему распластыванию клеток на поверхности, в результате чего формируется монослой. Образование тесной связи между поверхностью клетки и подложкой и по существу структурная и функциональная стабильность монослоя зависят от присутствия в среде гликопротеинов, способствующих прикреплению клеток [8]. жүктеу/скачать 40,05 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|