Реферат по дисциплине «Системная биология
Выбор соответствующего ответа клеток
жүктеу/скачать 40,05 Kb.
|
2.5 Выбор соответствующего ответа клетокВ результате взаимодействия между гормоном п специфичными к действию данного стимулятора рецепторами соответствующих клеток-мишеней в нормальных условиях in vivo происходят изменения в клеточном метаболизме: накапливаются метаболиты, расходуются вещества-предшественники, экскретируются в межклеточную среду специфические продукты метаболизма. Однако после извлечения тканей-мишеней из организма и ферментативного диспергирования изолированные клетки нередко теряют ряд специфических функциональных свойств. характерных для интактной ткани. и поэтому препараты иммобилизованных клеток не всегда способны продемонстрировать полную последовательность функциональных ответов, обычно возникающих при гормональной стимуляции исходной ткани. Тем не менее во многих случаях степени дифференцировки, сохраняющейся в условиях in vitro, бывает достаточно, чтобы выбрать несколько специфичных, ярко выраженных ответов клеток, на основе которых можно разработать метод биотестпрования данного гормона [9]. При изучении различных метаболических ответов, а также при выборе оптимального для разработки метода измерения биологической активности данного гормона следует оценивать каждый из ответов по следующим четырем критериям: 1) специфичность; 2) чувствительность ответа, характерные для данного препарата клеток; 3) точность определения в выбранном интервале доз гормона; 4) воспроизводимость ответа при использовании различных клеточных препаратов. Более того, поскольку каждый метаболический ответ должен быть количественным, при объективной оценке ответов клетки на действие изучаемого гормона большое значение имеет простота и эффективность способов выделения каждого метаболита, а также характеристики методов его определения, таких как радпоиммунологический анализ или твердофазный иммуноферментный анализ. Прежде всего необходимо изучить специфичность выбранного ответа клеток-мишеней на действие данного стимулятора. Не исключено, что действие действие данного стимулятора. Не исключено, что действие других гормонов, особенно гормонов, имеющих сходную с исследуемым структуру, может вызывать подобный ответ. Например,такие гликопротеиновые гормоны, как лютеинизирующий гормон, фолликулостимулирующий гормон, тиреотропный гормон и хронический гонадотропный гормон человека имеют идентичные а-субъединицы и, как п предполагалось, обладают перекрестной активностью при взаимодействии с ТТГ-рецепторами. Однако в большинстве случаев уровень функциональной перекрестной активности или простой блокировки рецепторов структурно сходными, но биологически неактивными молекулами можно свести до минимума, тщательно подбирая клетки-мишени и условия их инкубации, при которых достигается высокий уровень специфичности функционального ответа на действие исследуемого: стимулятора [7]. Следующий фактор, который необходимо принимать во внимание при оценке различных ответов, иммобилизованных клеток-мишеней – это чувствительность ответа. Практически это означает, что следует установить минимальную дозу гормона, которую измеряют с помощью данного метода регистрации ответа клеток. Чувствительность ответа определяют как наименьшее количество стимулятора, которое удается отличить от нулевой дозы при заданных условиях биотеста; его находят, построив для исследуемого гормона кривую доза – ответ. Можно установить, как влияют на чувствительность биотеста изменения условий инкубации, таких как плотность клеток-мишеней в монослое, время действия стимулятора, ионная сила и рН среды, а также выбрать условия, в которых чувствительность проводимого биотеста максимальна. Последний фактор, который необходимо учитывать при оценке различных функциональных ответов клеток-мишеней – это воспроизводимость биотеста от опыта к опыту. Используя отдельные монослои клеток, полученные из одной и той же исходной ткани, в различных, но следующих один за другим биотестах можно достичь хорошей воспроизводимости, при которой отклонения между биотестами не превышают 10–15% для доз гормона, приходящихся на участок максимальной точности кривой доза – ответ. Сходный по воспроизводимости ответ должны давать последовательные субкультуры стабильных клеточных линий. Однако для первичных культур, полученных из различных исходных тканей, это редко удается из-за вариабельности их способности к ответу. В таких случаях отклонения между биотестами достигают зачастую 40–50% [5]. жүктеу/скачать 40,05 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|