Быстрое развитие прогрессивных методов получения изолированных клеток, а также способов их сохранения in vitro в значительной степени облегчило эволюцию методов биотестирования, основанных на ответе культивируемых клеток. Во многих отношениях использование иммобилизованных клеток для биотестирования гормонов в биологических жидкостях или экстрактах тканей можно рассматривать как естественный переход от ранее применявшихся более трудоемких и менее точных методов культивирования целых органов или кратковременного культивирования клеток в суспензиях. В других случаях биотесты с применением иммобилизованных клеток пришли на смену биотестам, которые проводили in vivo на лабораторных животных, причем методики биотестирования при этом значительно усовершенствовались и сильно упростились [2].
2.1 Подложки для иммобилизации клеток
Длительность жизни, пролиферация и функциональная стабильность клеток, полученных ферментативным диспергированием тканей, в большой степени зависит от взаимодействия клеток с твердой подложкой, или матрицей для роста. Поэтому необходимо, чтобы методы культивирования и свойства подложки соответствовали оптимальным адгезионным свойствам клеток. Традиционно используемые стеклянные сосуды и чашки Петри мало пригодны для культивирования животных клеток, в связи с чем в последнее время нашли широкое применение одноразовые полистирольные платы и чашки, предварительно стерилизованные гамма-лучами. Кроме того, благодаря прекрасным оптическим свойствам полистирола иммобилизованные клетки очень удобно наблюдать в фазово-контрастный микроскоп [4].
Все клетки, полученные из тканей позвоночных, обладают отрицательным поверхностным зарядом, поэтому для их успешной иммобилизации подходят стеклянные или полистирольные подложки с отрицательно заряженной поверхностью, или же подложки, поверхность которых покрыта полилизином и обладает положительным зарядом. В любом случае связывание клеток в большей степени зависит от плотности заряда, чем от полярности. Чтобы обеспечить прочное прикрепление клеток разных видов, поверхность подложек для иммобилизации предварительно специально обрабатывают [7].
Достарыңызбен бөлісу: |