Реферат по дисциплине «Системная биология
Выбор клеток-мишеней для биотестов
жүктеу/скачать 40,05 Kb.
|
2.4 Выбор клеток-мишеней для биотестовВыбор клеток-мишеней, наиболее подходящих для биотеста на какой-либо определенный гормон, обусловливается как природой исследуемого гормона, так и стабильностью in vitro и характеристиками ответа используемых клеток. Конечной целью разработки биотестов является получение доступных штаммов клеток для непрерывного культивирования или стабильных клеточных линий, у которых в течение длительного времени характеристики ответа и роста постоянны. Такие линии отвечают требованиям, предъявляемым к идеальным тканям-мишеням. Однако во многих случаях еще не удалось выделить культуры клеток для непрерывного культивирования, и разработанные к настоящему времени системы биотестирования основываются на использовании клеток, полученных непосредственно из человеческих или животных тканей. Как правило, эти клетки выделяют из соответствующих естественных тканей-мишеней, реагирующих на определенный гормон in vivo, и поэтому в идеале их нужно получать из тканей тех же видов животных, что и тестируемый гормон. В биотестах на человеческие клеточные стимуляторы, т. е. гормоны, выполнить это требование достаточно трудно, поскольку часто нет возможности получить подходящие образцы тканей для приготовления клеточных препаратов, особенно в случае непатологических тканей. В связи с этим для проведения какого-либо определенного биотеста нередко приходится использовать животные ткани. Однако это можно делать только после тщательного и систематического изучения и сравнения специфичности взаимодействия и характеристик ответов человеческих и животных клеток-мишеней на разные дозы стандартного препарата гормона [6]. В биотестах на ряд гормонов появилась возможность использовать первичные культуры клеток, правда, их применение лимитируется ограниченной продолжительностью жизни клеток и присущей отдельным клеточным – препаратам вариабельностью ответа. К сожалению, функционально дифференцированные клетки в первичных культурах теряют многие из функционально специфических маркеров, причем иногда этот процесс сопровождается интенсивным ростом быстро пролиферирующих типов «примесных» клеток, например, фибробластов. Однако в период, в течение которого клетки-мишени способны отвечать на действие стимулятора, можно продлить, селективно уменьшив скорость пролиферации фибробластов. Этого добиваются, варьируя состав культуральной среды: уменьшая содержание сыворотки или полностью исключая ее из состава среды и подбирая определенные факторы роста и факторы, способствующие прикреплению клеток. Давно установлено, что in vivo функциональные характеристики чувствительных к гормонам тканей зависят не только от возраста и пола, но также от состояния здоровья и условий питания животного. Поэтому отнюдь не удивительно, что первичные монослой, приготовленные из таких тканей, характеризуются вариабельностью ответа клеток на действие стандартного препарата тестируемого стимулятора, что обусловлено характеристиками ответа in vivo различных исходных тканей. В сущности, каждый отдельный препарат иммобилизованных клеток представляет собой ткань-мишень для биотеста, однако широкое применение таких препаратов ограничено тем, что необходимо часто готовить новые монослои из свежих тканей, поскольку жизнь изолированных клеток непродолжительна и способность первичных культур к ответу на действие стимулятора постепенно уменьшается. Их используют лишь в тех случаях, когда одинаковая способность клеток к ответу не обязательна. Как уже указывалось выше, применяя штаммы клеток для непрерывного культивирования или устойчивые клеточные линии, можно решить большинство проблем, связанных с разработкой и внедрением в практику стабильных и воспроизводимых биотестов, основанных на использовании первичных клеточных культур. По определению такие штаммы и линии способны к неограниченной пролиферации, а в случае функционально дифференцированных чувствительных к гормону клеток характеризуются стабильным ответом на действие определенного специфического стимулятора. Это позволяет преодолеть затруднения, связанные с ограниченной продолжительностью жизни первичных культур п уменьшением их способности к ответу на действие гормона [8]. жүктеу/скачать 40,05 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|